Anticorps polyclonal de lapin Anti-SARS-CoV-2 Spike S2 ECD pour WB, DB, IF/ICC, IP et ELISA - P0DTC2

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la glycoprotéine Spike (S)

• La glycoprotéine Spike (S) est une protéine de fusion virale de classe I qui est clivée en sous-unités S1 et S2. S1 contient le domaine de liaison au récepteur, tandis que S2 ancre la protéine et réalise la fusion membranaire.
• S1 se fixe au récepteur hôte ACE2 pour initier l'infection. Les récepteurs d'entrée alternatifs incluent la neuropiline-1 (NRP1), la neuropiline-2 (NRP2), les intégrines et le récepteur 1 de l'asialoglycoprotéine (ASGR1), qui peuvent contribuer au tropisme du SARS-CoV-2 dans les cellules à faible expression d'ACE2.
  Références associées :
  PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086, PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• Le clivage protéolytique de S2 au niveau du site S2' par la TMPRSS2 hôte (surface cellulaire) ou la cathepsine L (endosomale) déclenche des changements conformationnels irréversibles qui conduisent à la fusion de l'enveloppe virale avec la membrane hôte, libérant le génome viral dans le cytoplasme.
  Références associées :
  PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• La sous-unité S2 contient des régions répétées heptadiques (HR1 et HR2) qui se replient en un faisceau à six hélices, rapprochant les membranes virale et cellulaire pour permettre la fusion.
• Au niveau sous-cellulaire, la protéine Spike se localise sur la membrane du virion, le compartiment intermédiaire hôte ER-Golgi (ERGIC) et la membrane plasmique de la cellule hôte.
• La protéine Spike est fortement N-glycosylée et palmitoylée, contient des ponts disulfures, fonctionne comme un superantigène ; elle supprime également les réponses immunitaires innées de l'hôte et contrecarre la tetherine.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre le domaine extracellulaire S2 (aa 686-1214), incluant les éléments fonctionnels conservés tels que le peptide de fusion et les répétitions heptadiques. Cette conception permet la détection de S2 même après le détachement de S1.
• Pour le Western blot, la protéine Spike entière migre à ~141 kDa dans des conditions réductrices ; une bande de ~70-80 kDa peut être observée pour le S2 clivé. Validez vos conditions de lyse et de préparation d'échantillon.
• En immunofluorescence/ICC, incluez une étape de perméabilisation pour détecter la protéine Spike localisée dans les compartiments intracellulaires (ERGIC) en plus de la membrane plasmique.
• Pour l'ELISA de capture, envisagez d'associer ce pAb avec un anticorps monoclonal dirigé contre la sous-unité S1 pour mesurer spécifiquement la protéine Spike entière, ou utilisez-le comme réactif de détection pour quantifier les niveaux de S2.
• Le Dot blot (DB) peut être utilisé pour le criblage rapide de l'expression d'antigène dans les lysats cellulaires ou les protéines recombinantes ; optimisez la concentration d'antigène et les conditions de tampon.
• L'immunoprécipitation (IP) peut capturer les complexes de protéine Spike ; incluez des contrôles négatifs appropriés pour évaluer la liaison non spécifique.

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