Anticorps polyclonal anti-SARS-CoV-2 3CLpro pour WB, IF/ICC, ELISA - P0DTC2

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la 3CLpro du SARS-CoV-2

• La glycoprotéine de spicule (S) est une protéine de fusion virale de classe I qui médie l'entrée du SARS-CoV-2 dans les cellules hôtes. Elle est synthétisée sous forme de précurseur et clivée protéolytiquement en sous-unités S1 et S2.
• La sous-unité S1 contient le domaine de liaison au récepteur (RBD) qui interagit avec le récepteur humain ACE2 (enzyme de conversion de l'angiotensine 2) pour faciliter l'attachement viral aux cellules hôtes. Références associées : PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Les voies d'entrée alternatives utilisent la neuropiline-1 (NRP1), NRP2, les intégrines ou ASGR1, ce qui peut contribuer au tropisme tissulaire, en particulier dans les cellules épithéliales olfactives qui expriment de faibles niveaux d'ACE2. Références associées : PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059
• La sous-unité S2 médie la fusion membranaire via un réarrangement conformationnel dépendant de charnières, passant d'un état pré-fusion à un état post-fusion en épingle à cheveux, nécessitant un clivage au site S2' par des protéases de l'hôte telles que TMPRSS2 ou la cathepsine L. Références associées : PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• Le domaine de la tige de S contient trois charnières, conférant à la tête de liaison au récepteur une remarquable liberté d'orientation, ce qui peut faciliter l'évasion immunitaire. Références associées : PMID:32817270
• La localisation subcellulaire comprend la membrane du virion, la membrane du compartiment intermédiaire réticulum endoplasmique–Golgi (ERGIC) de l'hôte et la membrane cellulaire de l'hôte, ce qui est cohérent avec ses rôles dans l'assemblage, la sortie et l'entrée.
• La protéine est fortement glycosylée et contient des ponts disulfure conservés, des régions en super-hélice et des domaines transmembranaires ; elle présente également des propriétés superantigéniques et contribue à l'évasion immunitaire.
• Son poids moléculaire est d'environ 141 kDa, et elle est une cible clé pour les anticorps neutralisants, les tests de diagnostic et le développement de vaccins.

Guide expérimental et conseils techniques

• Étant donné que l'immunogène est un fragment recombinant de la 3CLpro (acides aminés 1-306), utilisez des contrôles positifs appropriés tels que des lysats de cellules infectées par le SARS-CoV-2 ou de la 3CLpro recombinante purifiée pour valider la spécificité.
• Pour le Western blot, envisagez d'optimiser les conditions de blocage et de dilution de l'anticorps ; une bande à environ 34 kDa (3CLpro pleine longueur) est attendue, mais le fournisseur signale une bande à 141 kDa (correspondant probablement à la protéine Spike). Vérifiez la bande détectée avec des marqueurs de poids moléculaires et des antigènes de contrôle appropriés.
• Dans les expériences d'immunofluorescence/ICC, incluez des étapes de perméabilisation pour la détection de la protéase intracellulaire et une contre-coloration avec des marqueurs d'organites pour évaluer la localisation subcellulaire.
• Pour l'ELISA, la nature polyclonale permet son utilisation à la fois comme anticorps de capture et de détection dans des formats sandwich. Associez-le à des anticorps monoclonaux dirigés contre des épitopes distincts pour améliorer la spécificité et le rapport signal/bruit.
• Envisagez une réactivité croisée potentielle avec la 3CLpro d'autres coronavirus ; l'alignement des séquences et des tests d'inhibition compétitive peuvent aider à confirmer la spécificité.
• Validez toujours l'anticorps dans votre système expérimental spécifique, car les performances peuvent varier selon le type d'échantillon et les méthodes de fixation.

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