Anticorps polyclonal de lapin anti-Rubicon pour WB, ELISA - Q92622

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Rubicon

• Rubicon (protéine contenant un domaine Run interagissant avec Beclin-1 et un domaine riche en cystéine), également connu sous le nom de Baron, est codé par le gène RUBCN (KIAA0226). L'épissage alternatif produit plusieurs isoformes.
• Rubicon fonctionne comme un inhibiteur central de l'autophagie et du trafic endosomal : il supprime l'activité de PIK3C3, altère la fonction du complexe PI3KC3-C2, bloque la maturation de l'autophagosome et empêche l'activation dépendante d'UVRAG de Rab7 sur les endosomes. Références connexes : PMID:20974968 PMID:21062745
• Dans les macrophages activés, Rubicon favorise les réponses antibactériennes en stabilisant le complexe oxydase NADPH CYBA:CYBB, améliorant la production de ROS dépendante de TLR2 et la destruction phagocytaire. Références connexes : PMID:22423966
• Suite à une infection fongique ou virale, Rubicon régule négativement la production de cytokines pro-inflammatoires en se liant à CARD9 et en le séquestrant des complexes de signalisation. Références connexes : PMID:22423967
• Au niveau subcellulaire, Rubicon se localise aux endosomes tardifs, aux lysosomes et aux endosomes précoces, ce qui est cohérent avec ses rôles dans le trafic endocytaire et la régulation de l'autophagosome.
• La protéine contient des sites de phosphorylation et est sujette à des modifications post-traductionnelles ; elle est impliquée dans les voies de neurodégénérescence et identifiée dans des études protéomiques.
• Poids moléculaire prédit de 108,6 kDa ; migre expérimentalement à environ 109 kDa sur SDS-PAGE.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond au domaine N-terminal (acides aminés 1-200), ce qui peut permettre de détecter toutes les isoformes connues. Vérifiez la spécificité dans des lysats de cellules et de tissus pertinents.
• Pour le Western blot, envisagez d'utiliser un SDS-PAGE réducteur et une membrane de nitrocellulose ; la bande attendue est d'environ 109 kDa.
• Les concentrations de travail optimales doivent être déterminées expérimentalement ; les dilutions de départ typiques pour les anticorps polyclonaux en WB vont de 1:500 à 1:2000.
• L'anticorps réagit de manière croisée avec le Rubicon de souris et de rat, ce qui le rend adapté aux études comparatives sur des modèles rongeurs.
• Pour l'ELISA, envisagez d'utiliser l'immunogène recombinant comme témoin positif et titrez l'anticorps en conséquence.
• Validez l'anticorps dans votre système expérimental spécifique en utilisant des témoins positifs et négatifs (par exemple, des lysats avec knockdown ou knockout de RUBCN).

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