Anticorps polyclonal de lapin anti-RRM1 pour WB, IF/ICC, IP, ELISA - P23921

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de RRM1

• RRM1 est la grande sous-unité de la ribonucléotide réductase (RNR), une enzyme hétérodimérique essentielle à la synthèse de novo des diphosphates de déoxyribonucléosides (dNDP) à partir de diphosphates de ribonucléosides (rNDP), fournissant les précurseurs monomériques nécessaires à la réplication et à la réparation de l'ADN.
• Il fonctionne comme une enzyme allostérique, dont l'activité est régulée par la liaison de l'ATP et la spécificité pour les substrats nucléotidiques contrôlée par la liaison du dATP, du dGTP ou du dTTP au site de spécificité.
• RRM1 doit former un complexe avec une petite sous-unité (RRM2 ou p53R2) pour former l'holoenzyme active ; la grande sous-unité apporte les sites catalytiques et de régulation allostérique.
• Au niveau subcellulaire, RRM1 est principalement cytoplasmique, là où se déroulent le métabolisme des nucléotides et la synthèse des précurseurs de l'ADN.
• Les modifications post-traductionnelles incluent l'acétylation et la phosphorylation, qui peuvent moduler l'activité enzymatique, la stabilité ou les interactions protéine-protéine.
• Les mutations de RRM1 sont associées aux syndromes de déplétion de l'ADN mitochondrial de forme autosomique récessive, incluant l'ophtalmoplégie externe progressive, ce qui met en évidence son rôle essentiel dans le maintien de pools équilibrés de dNTP pour la synthèse de l'ADN mitochondrial.
• La protéine appartient à la famille des ribonucléotide réductases de classe I et partage une homologie structurelle avec les grandes sous-unités de RNR bactériennes et eucaryotes.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Compte tenu de l'immunogène (région C-terminale aa 593-792), l'anticorps est censé reconnaître la protéine RRM1 entière (~90 kDa) et peut détecter des isoformes ou des produits de clivage ; prévoyez des marqueurs de poids moléculaire et des contrôles appropriés.
• Pour le Western blot, utilisez des conditions de chargement et de transfert optimisées pour les cibles de haut poids moléculaire ; envisagez la chimiluminescence améliorée et des temps d'exposition prolongés.
• En immunofluorescence/ICC, attendez une localisation cytoplasmique ; fixez et perméabilisez les cellules de manière appropriée (par exemple, 4 % de PFA suivi d'une perméabilisation au Triton X-100) pour garantir l'accès de l'anticorps.
• Pour l'immunoprécipitation, confirmez la compatibilité avec votre tampon de lyse et vos conditions d'élution ; utilisez un lysat de contrôle positif (par exemple, HeLa ou HEK293) pour vérifier l'efficacité de capture.
• L'anticorps présente une réactivité avec l'humain et la souris ; si vous testez d'autres espèces, validez la réactivité croisée en raison d'une éventuelle divergence de séquence dans l'épitope ciblé.

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