Anticorps monoclonal de lapin anti-Rpb1 CTD pour WB, IF/ICC, IHC-P, ChIP, ELISA - P24928

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation du domaine CTD de Rpb1

• POLR2A code Rpb1, la plus grande sous-unité catalytique de l’ARN polymérase II (Pol II) dépendante de l’ADN, responsable de la synthèse des précurseurs d’ARNm et des ARN non codants. L’enzyme utilise l’ADN comme matrice et les ribonucléosides triphosphates pour polymériser l’ARN, selon des étapes d’initiation, d’élongation et de terminaison. (PubMed:23748380, PubMed:27193682, PubMed:30190596, PubMed:28108474, PubMed:8381534, PubMed:9852112) Références associées : PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596, PMID:28108474, PMID:8381534, PMID:9852112
• Le domaine CTD de Rpb1, qui contient 52 répétitions en tandem d’heptapeptides, sert de plateforme aux régulateurs de la transcription. La phosphorylation de Ser5 (Ser5P) facilite l’échappement au promoteur, tandis que la phosphorylation de Ser2 (Ser2P) est nécessaire à la levée de la pause et à l’élongation. En outre, l’acétylation des lysines du CTD régule l’induction des gènes de réponse précoce, tandis que la méthylation/diméthylation réprime généralement l’expression des gènes cibles. (PubMed:24207025, PubMed:26124092) Références associées : PMID:24207025, PMID:26124092
• Rpb1 possède une activité exonucléase 3'→5' qui effectue la relecture de l’ARN naissant, permettant le retour en arrière et le clivage des nucléotides incorrectement incorporés. (PubMed:8381534) Références associées : PMID:8381534
• Au-delà de son rôle dépendant de l’ADN, Rpb1 présente une activité d’ARN polymérase dépendante de l’ARN, en allongeant des ARN non codants à l’aide d’une matrice interne, et peut répliquer le génome du virus de l’hépatite delta lorsqu’elle est associée au petit antigène delta viral.
• Rpb1 se localise principalement dans le noyau, où a lieu la transcription, mais a également été détectée dans le cytoplasme et sur les chromosomes, ce qui concorde avec ses rôles dans la transcription et ses fonctions potentiellement extran nucléaires.
• Les modifications post-traductionnelles de Rpb1 comprennent la phosphorylation, l’acétylation, la méthylation, l’ubiquitination et la sumoylation, qui régulent dynamiquement son activité et ses interactions.
• L’épissage alternatif de POLR2A produit plusieurs isoformes, bien que leurs différences fonctionnelles restent à élucider complètement.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène correspond aux acides aminés 1611 à 1710 du domaine CTD, ce qui suggère que l’anticorps détecte la Rpb1 totale ou un épitope CTD spécifique ; vérifiez la réactivité dépendante de la phosphorylation à l’aide d’échantillons traités à la phosphatase.
• Pour le Western blot, la protéine Rpb1 de pleine longueur est prédite à environ 217 kDa ; des bandes supplémentaires (par exemple, ~64 kDa) peuvent correspondre à des isoformes ou à des produits de dégradation ; validez les résultats avec des contrôles appropriés.
• Cet anticorps a été utilisé dans des essais de ChIP ; optimisez les conditions de réticulation et de fragmentation de la chromatine en fonction de vos loci cibles spécifiques.
• Pour l’immunofluorescence, prévoyez un marquage nucléaire ; effectuez un double marquage avec un marqueur cytoplasmique afin de confirmer la localisation.

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