Anticorps Polyclonal Anti-RPA2 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P15927

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation du RPA2

• Le RPA2, également connu sous le nom de sous-unité de 32 kDa de la protéine de réplication A (RP-A p32) ou RP-A p34, est un composant du complexe hétérotrimérique de la protéine de réplication A (RPA), qui comprend RPA1 (70 kDa), RPA2 (32 kDa) et RPA3 (14 kDa).
• Le complexe RPA se lie et stabilise les intermédiaires d'ADN simple brin (ssDNA) qui surviennent lors de la réplication, de la réparation et de la recombinaison de l'ADN, empêchant leur réappariement et facilitant le recrutement de protéines métaboliques clés.
• Dans la réplication de l'ADN, le RPA est essentiel pour les phases d'initiation et d'élongation, assurant une synthèse d'ADN processive et protégeant la fourche de réplication.
• Lors de dommages à l'ADN, le complexe RPA agit comme un capteur et une plateforme : il recrute la kinase ATR via ATRIP, activant le point de contrôle des dommages à l'ADN, et recrute des facteurs de réparation tels que RAD51 et RAD52 pour la recombinaison homologue, ainsi que XPA et XPG pour la réparation par excision de nucléotides.
• Le RPA2 joue également un rôle dans la réparation par excision de bases (BER) par son interaction avec l'uracile-DNA glycosylase (UNG) et recrute SMARCAL1/HARP sur les sites de dommages pour le redémarrage de la fourche de réplication.
• De plus, le RPA stimule l'activité hélicase 5'-3' de BRIP1/FANCJ, qui est impliquée dans la réparation des ponts interbrins et le maintien des télomères. Références connexes : PMID:17596542
• La protéine est principalement nucléaire et se localise dans les corps PML ; elle subit des modifications post-traductionnelles étendues, notamment la phosphorylation, l'acétylation et l'ubiquitination, qui régulent ses fonctions dans le métabolisme de l'ADN.
• L'épissage alternatif génère plusieurs isoformes, ce qui se reflète par les poids moléculaires observés de 29, 30 et 38 kDa.

Conseils Expérimentaux et Techniques

• L'immunogène correspond aux résidus 1-270 du RPA2 humain ; par conséquent, l'anticorps peut reconnaître plusieurs isoformes. Pour le Western blot, attendez-vous à des bandes autour de 29–38 kDa ; validez sur des lignées cellulaires ou tissus humains pertinents.
• Le RPA2 est une phosphoprotéine nucléaire. Envisagez d'utiliser des inhibiteurs de phosphatases dans les tampons de lyse et, si nécessaire, comparez avec des échantillons traités à la phosphatase pour résoudre les décalages dépendants de la phosphorylation.
• Pour l'immunohistochimie (IHC-P), les méthodes standard de récupération d'antigène sont recommandées. Optimisez la dilution de l'anticorps primaire et les conditions de détection pour votre type de tissu.
• Pour l'immunofluorescence (IF/ICC), utilisez des protocoles de fixation et de perméabilisation adaptés aux antigènes nucléaires. Incluez des témoins appropriés pour confirmer la spécificité.
• Cet anticorps convient également pour l'ELISA ; assurez-vous que la protéine recombinante ou le lysat est correctement enrobé et bloqué.

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