Anticorps polyclonal de lapin anti-ROBO1 pour WB, IF/ICC, ELISA - Q9Y6N7

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de ROBO1

• ROBO1 (homologue 1 de Roundabout), également connu sous les noms DUTT1 (Deleted in U Twenty Twenty) ou H-Robo-1, est un récepteur des signaux de guidage SLIT1 et SLIT2.
• Il assure la navigation axonale au niveau de la ligne médiane ventrale du tube neural ainsi que la projection des axones au cours du développement neuronal. Références connexes : PMID:10102268, PMID:24560577
• L’interaction avec le domaine intracellulaire de FLRT3 assure l’attraction des axones vers les cellules exprimant NTN1. Références connexes : PMID:24560577
• La protéine est localisée au niveau de la membrane cellulaire, des projections axonales et de la membrane du compartiment intermédiaire entre le réticulum endoplasmique et l’appareil de Golgi.
• Elle est largement exprimée dans les tissus, à l’exception des reins.
• ROBO1 régule la migration cellulaire en interagissant avec MYO9B, ce qui entraîne une augmentation des niveaux de RHOA actif lié au GTP. Références connexes : PMID:26529257
• La protéine contient des domaines d’immunoglobuline, des répétitions de type III de la fibronectine et un domaine transmembranaire ; elle est soumise à la glycosylation, à la phosphorylation et à l’ubiquitination.
• Les isoformes issues d’un épissage alternatif et les variants associés à des maladies (par exemple CPHD8, nanisme, déficience intellectuelle) soulignent son importance dans le développement et les maladies.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Pour le Western blot, prévoir une bande autour de 181 kDa ; inclure des marqueurs de poids moléculaire et valider les résultats avec un contrôle positif connu (par exemple un lysat de cellules HEK293 ou de cerveau de souris).
• L’immunogène couvre les acides aminés 1452–1651 dans la région C-terminale ; confirmer la spécificité en préincubant l’anticorps avec le peptide immunogène lors d’expériences de blocage.
• Pour l’IF/ICC, utiliser des lignées cellulaires exprimant ROBO1 (par exemple des cultures de neuroblastome ou de neurones corticaux) et effectuer les étapes de perméabilisation ; un marquage conjoint avec des marqueurs axonaux peut aider à vérifier la localisation.
• Compte tenu de la réactivité croisée avec la souris et le rat, cet anticorps peut convenir aux modèles rongeurs du neurodéveloppement ; effectuer un titrage initial dans l’espèce prévue.
• Pour l’ELISA, envisager l’utilisation de fragments recombinants du domaine extracellulaire de ROBO1 comme réactifs de capture et valider les résultats par des essais de compétition de liaison avec SLIT1/2.

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