Anticorps monoclonal de lapin anti-RNF8 pour WB, IHC-P, ELISA - O76064

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de RNF8

• L'E3 ubiquitine-protéine ligase RNF8 (protéine à doigt RING 8) est un médiateur clé de la réponse aux dommages à l'ADN. Elle est recrutée sur les cassures double-brin par MDC1 phosphorylé par ATM, où elle catalyse l'ubiquitination des histones H2A et H2AX liée au résidu Lys-63, facilitant l'assemblage de protéines de réparation de l'ADN telles que BRCA1 et TP53BP1 au niveau des foyers induits par les rayonnements ionisants.
  Références associées : PMID:18001824, PMID:18006705
• RNF8 favorise le recrutement du complexe de l'anémie de Fanconi et de facteurs comme FAAP20 sur les liaisons interbrins de l'ADN en médiant l'ubiquitination de H2A/H2AX, et coordonne également le silençage transcriptionnel dépendant d'ATM près des cassures double-brin pour éviter les collisions entre transcription et réparation.
• Par le biais d'interactions distinctes avec les enzymes E2, RNF8 peut former des chaînes de polyubiquitine liées au résidu Lys-48 (par exemple avec UBE2L6), conduisant à la dégradation protéasomique de substrats tels que CHEK2, JMJD2A/KDM4A et KU80/XRCC5, modulant ainsi le choix de la voie de réparation et l'accessibilité de la chromatine.
  Références associées : PMID:11322894, PMID:14981089, PMID:17724460
• Elle contribue à la décondensation de la chromatine d'ordre supérieur et active indirectement la kinase ATM en favorisant l'ubiquitination de l'histone H2B qui déclenche l'acétylation de H4K16.
• RNF8 est essentielle à la spermatogenèse, elle stimule le remplacement des histones pendant la maturation des spermatozoïdes et participe à la recombinaison de commutation de classe dans le système immunitaire par son rôle dans la réparation des cassures double-brin.
  Références associées : PMID:22865450
• La protéine se localise majoritairement dans le noyau, et est également présente dans le cytoplasme, le corps médian et aux télomères, ce qui est cohérent avec ses rôles multiples dans la progression du cycle cellulaire et la stabilité du génome.
• L'expression tissulaire est ubiquitaire, avec des niveaux les plus élevés dans le cerveau, le thymus et le foie pendant le développement fœtal, et dans le cerveau et les testicules chez l'adulte, ce qui souligne son importance générale dans la réparation de l'ADN et la régulation de la chromatine.
• La protéine RNF8 contient un domaine doigt RING, est classée comme phosphoprotéine et a un poids moléculaire d'environ 55,5 kDa (UniProt : 55518 Da). Les mots-clés soulignent également son implication dans les interactions hôte-virus, la liaison aux métaux (zinc) et la conjugaison de l'ubiquitine.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond aux 1–260 acides aminés N-terminaux de RNF8 humain ; l'anticorps peut donc reconnaître des épitopes dans la région N-terminale, y compris le domaine FHA, qui est impliqué dans les interactions dépendantes de la phosphorylation.
• Pour le Western blot, RNF8 migre normalement avec un poids moléculaire apparent d'environ 56 kDa dans les lysats de cellules humaines, de souris et de rat ; utilisez des contrôles positifs et négatifs appropriés pour confirmer la spécificité.
• Pour l'IHC-P, envisagez d'optimiser la récupération d'antigène (par exemple, tampon citrate, pH 6,0) et validez sur des tissus connus pour exprimer RNF8, comme les testicules ou le cerveau.
• Pour l'ELISA, les utilisateurs doivent déterminer les concentrations de revêtement et les conditions de détection optimales en utilisant l'antigène recombinant ou les types d'échantillons pertinents.
• La réactivité croisée avec RNF8 de souris et de rat a été rapportée ; vérifiez les performances dans les systèmes modèles pertinents avant une utilisation routinière.

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