Anticorps monoclonal de lapin anti-RhoGAP (p190-B) pour WB, IP, ELISA - Q13017

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de RhoGAP

• La protéine 5 activatrice des Rho GTPases (ARHGAP5, également appelée p190-B ou RhoGAP5) appartient à la famille des RhoGAP et fonctionne comme une protéine activatrice des GTPases (GAP) pour les petites GTPases de la famille Rho, en augmentant leur activité intrinsèque d’hydrolyse du GTP afin de mettre fin à la signalisation (PubMed:8537347). Références associées : PMID:8537347
• La protéine subit un épissage alternatif, générant plusieurs isoformes susceptibles de présenter une expression spécifique à certains tissus et une diversité fonctionnelle.
• ARHGAP5 est principalement localisée dans le cytoplasme et peut s’associer à la membrane cellulaire, ce qui correspond à son rôle dans la régulation des Rho GTPases au niveau des sites de signalisation proches de la membrane.
• La protéine est une phosphoprotéine et son activité peut être modulée par phosphorylation sur tyrosine, ce qui la relie aux voies de signalisation des facteurs de croissance et des intégrines.
• Elle est spécifiquement détectée au niveau protéique dans les fibroblastes cutanés, ce qui suggère un rôle dans la biologie des fibroblastes et éventuellement dans la cicatrisation ou le remodelage du tissu conjonctif.
• Mots-clés d’UniProt : structure 3D, épissage alternatif, membrane cellulaire, cytoplasme, activation des GTPases, membrane, nitration, phosphoprotéine, identification par protéomique, protéome de référence, répétition. Ceux-ci mettent en évidence ses caractéristiques structurelles et régulatrices.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène correspond aux acides aminés 1150–1300 de la RhoGAP humaine (Q13017), une région potentiellement bien conservée entre les espèces (réactivité croisée avec la souris et le rat). Validez la spécificité dans l’espèce concernée par un alignement de séquences ou une première analyse par Western blot.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire prédit est d’environ 172 kDa. Utilisez des pourcentages de gel appropriés (par exemple, SDS-PAGE à 6–8 %) ainsi que des contrôles de chargement. Confirmez la spécificité de la bande à l’aide de lysats témoins positifs (par exemple, des lysats de fibroblastes cutanés, sur la base des données d’expression tissulaire).
• Dans les expériences d’immunoprécipitation (IP), optimisez la concentration d’anticorps par titration et incluez des contrôles IgG appropriés. Envisagez de réticuler l’anticorps aux billes afin de réduire les interférences de la chaîne lourde lors de la détection WB ultérieure.
• Pour l’ELISA, associez-le à un anticorps de détection compatible ou utilisez-le comme anticorps de capture selon le format du test. Validez avec une protéine RhoGAP recombinante ou des lysats cellulaires exprimant la cible.
• Comme il s’agit d’un anticorps monoclonal de lapin, des performances constantes d’un lot à l’autre sont attendues. Toutefois, revalidez chaque nouveau lot dans votre application et votre système d’échantillons spécifiques.

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