Anticorps polyclonal anti-RB pour WB, IF/ICC, ELISA - P06400

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de RB

• RB (protéine associée au rétinoblastome) est un suppresseur de tumeur et un régulateur clé de la transition du cycle cellulaire G1/S. La forme hypophosphorylée se lie aux facteurs de transcription E2F et réprime la transcription des gènes nécessaires à l’entrée en phase S. La phosphorylation dépendante de Cycline/CDK libère les E2F, déclenchant la progression du cycle cellulaire (PubMed:10499802). RB favorise également la transition G0-G1 par phosphorylation via CDK3/cycline-C (PubMed:15084261).

  Références associées : PMID:10499802 PMID:15084261

• Participe directement à la formation de l’hétérochromatine en stabilisant la méthylation des histones et en recrutant les méthyltransférases des histones SUV39H1, KMT5B et KMT5C. Contrôle la triméthylation de la lysine 20 de l’histone H4, conduisant à une répression transcriptionnelle épigénétique.

• Médie la répression transcriptionnelle par SMARCA4/BRG1 en recrutant un complexe d’histone désacétylase (HDAC) au niveau du promoteur de c-FOS. Dans les neurones au repos, un complexe répresseur phospho-RB1-HDAC1 inhibe la transcription de c-FOS ; l’afflux de calcium déphosphoryle RB1 via la calcineurine, levant ainsi la répression.

• La localisation subcellulaire comprend le noyau et le cytoplasme.

• Exprimée dans la rétine et les kératinocytes du prépuce (au niveau protéique) (PubMed:20940255).

  Références associées : PMID:20940255

• Soumise à des modifications post-traductionnelles clés : acétylation, méthylation et phosphorylation étendue, qui régulent son activité et ses interactions.

• Lors d’une infection virale, le grand antigène T du SV40, la protéine E7 du HPV ou la protéine E1A de l’adénovirus se lient à RB1, perturbant le complexe RB1-E2F1 et abolissant sa fonction de suppresseur de tumeur.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène correspond à la région C-terminale (aa 701-928), qui est bien conservée et devrait générer une réactivité contre la protéine RB pleine longueur (environ 106 kDa).
• Pour le Western blot, utilisez un marqueur de poids moléculaire de gamme intermédiaire afin de distinguer clairement la bande à 106 kDa. Les extraits nucléaires sont recommandés pour une détection optimale de la protéine RB endogène. Validez l’anticorps dans des lignées cellulaires humaines pertinentes (par exemple, présentant un statut RB connu) et envisagez un contrôle avec peptide bloquant en cas de bruit de fond.
• En IF/ICC, optimisez les conditions de fixation et de perméabilisation ; la fixation au méthanol peut mieux préserver les épitopes nucléaires de RB. Pour l’ELISA, l’immunogène recombinant peut servir de contrôle positif.
• Comme il s’agit d’un anticorps polyclonal produit chez le lapin, la cohérence d’un lot à l’autre peut varier. Incluez les contrôles appropriés et validez chaque nouveau lot.

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