Anticorps polyclonal de lapin anti-RAG1 pour WB, ELISA - P15918

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de RAG1

• RAG1 (Protéine 1 activatrice de la recombination, également connue sous le nom de RAG-1 et RNF74) est le composant catalytique du complexe RAG, essentiel pour la recombination V(D)J qui assemble les gènes diversifiés des immunoglobulines et des récepteurs des cellules T dans les lymphocytes en développement.
• Elle se lie directement aux séquences de signal de recombination conservées (RSS) et catalyse des cassures double brin de l'ADN spécifiques du site via un mécanisme en deux étapes : un clivage initial en amont de l'heptamère, suivi de la formation d'une épingle à cheveu par transestérification, créant des extrémités signaux franches et des extrémités codantes en épingle à cheveu. RAG2 est requise pour toutes les activités catalytiques.
• Au-delà de son activité endonucléasique, RAG1 fonctionne comme une ligase E3 d'ubiquitine-protéine qui monoubiquitine l'histone H3 à des sites inconnus, une modification nécessaire à l'étape de jonction de la recombination V(D)J. De plus, la triméthylation de H3 sur la Lys-4 (H3K4me3) stimule les deux étapes de clivage.
• RAG1 se localise dans le noyau, où elle interagit avec la chromatine pour médier les événements de recombination.
• Son expression est restreinte aux cellules lymphoïdes en maturation, ce qui est cohérent avec son rôle dans le développement lymphocytaire.
• RAG1 participe également à l'exclusion allélique des pré-cellules B en induisant un repositionnement dépendant de l'ATM d'un allèle d'immunoglobuline vers l'hétérochromatine péricentromérique, empêchant la recombination du second allèle et assurant la clonalité.
• La protéine subit un épissage alternatif, et sa nature multifonctionnelle est soulignée par des mots-clés tels que liaison à l'ADN, endonucléase, hydrolase, liaison aux métaux (doigt de zinc), transférase, conjugaison ubl, et des variants liés à des maladies comme l'immunodéficience combinée sévère (SCID).

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre la région N-terminale (acides aminés 1-270) de la protéine RAG1 humaine, qui inclut le domaine de liaison à l'ADN. Cette région peut détecter de multiples isoformes résultant de l'épissage alternatif.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire prédit est d'environ 119 kDa. Envisagez d'utiliser un gel SDS-PAGE à 6-8% et des temps de transfert prolongés pour les protéines de haut poids moléculaire.
• Les protocoles ELISA peuvent utiliser un enrobage avec la protéine recombinante RAG1 ou un peptide ; validez les conditions du test dans votre matrice d'échantillon pour assurer la spécificité.
• Une réactivité croisée avec la souris est attendue ; validez les performances dans les tissus lymphoïdes ou les lignées cellulaires de souris si vous utilisez ces systèmes.
• Des extraits protéiques de lignées cellulaires lymphoïdes humaines ou murines (par exemple, Jurkat, Raji, EL4) sont probablement des contrôles positifs appropriés ; les lignées cellulaires non lymphoïdes peuvent servir de contrôles négatifs.

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