Anticorps polyclonal de lapin anti-Raf1 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P04049

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Raf1

• RAF1 (également appelé c-Raf, Raf-1) est une serine/thréonine-protéine kinase qui constitue un lien essentiel entre les GTPases Ras associées à la membrane et la cascade MAPK/ERK, régulant la prolifération cellulaire, la différenciation, l'apoptose et la survie.
• L'activation de RAF1 initie une cascade de phosphorylation via MEK1/2 et ERK1/2, contrôlant finalement la transcription des gènes impliqués dans la progression du cycle cellulaire et la transformation.
• RAF1 phosphoryle de multiples cibles en aval, notamment BAD (au niveau de Ser-75), les adénylyl cyclases (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A, TNNT2, et module la signalisation NF-kB, la motilité, l'apoptose, la prolifération et l'angiogenèse.
• Localisation subcellulaire : RAF1 est présente dans le cytoplasme, la membrane cellulaire, la mitochondrie et le noyau, et sa translocation vers la mitochondrie médie les effets anti-apoptotiques via la liaison à BCL2.
• Spécificité tissulaire : Dans le muscle squelettique, l'isoforme 1 est plus abondante que l'isoforme 2.
• Modifications post-traductionnelles : RAF1 est phosphorylée au niveau des Ser-338 et Ser-339 par PAK1, et est soumise à la méthylation, la liaison métallique (zinc) et à l'épissage alternatif, donnant naissance à de multiples isoformes.
• Associé à des pathologies : Les mutations et la dérégulation de RAF1 sont liées aux cardiomyopathies (CMD1NN) et à la surdité, ce qui souligne son rôle dans divers processus physiologiques.
• Rôles biologiques clés : Agit comme proto-oncogène, régulant la cicatrisation des plaies, la transformation des cellules épithéliales et la suppression de l'apoptose.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Pour le Western blotting, l'anticorps détecte une bande à ~73 kDa. Il est recommandé d'utiliser des contrôles positifs tels que des lysats cellulaires de HeLa, HEK293 ou Jurkat.
• En immunohistochimie, un traitement de récupération d'antigène peut être nécessaire ; envisagez de tester à la fois les méthodes thermique et enzymatique sur les tissus inclus en paraffine.
• Pour l'immunofluorescence, incluez une perméabilisation au Triton X-100 et utilisez des anticorps secondaires appropriés ; notez que Raf1 se localise dans le cytoplasme, la membrane et le noyau.
• L'immunogène couvre les acides aminés 190-350, ce qui peut permettre la reconnaissance de plusieurs isoformes de Raf1 ; une validation sur les espèces concernées (humain, souris, rat) est recommandée.
• En tant qu'anticorps polyclonal, une variabilité d'un lot à l'autre peut survenir ; vérifiez les performances dans le test prévu avec des contrôles appropriés.

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