Anticorps polyclonal de lapin anti-PSMD14 pour WB, IF/ICC, ELISA - O00487

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de la PSMD14

• La PSMD14, également connue sous les noms POH1 ou RPN11, est un composant de la sous-unité régulatrice du protéasome 26S, un vaste complexe multiprotéique responsable de la dégradation dépendante de l'ATP des protéines ubiquitinylées, essentielle à l'homéostasie protéique, à la progression du cycle cellulaire, à l'apoptose et à la réparation de l'ADN. Références connexes : PMID:9374539 PMID:1317798

• Elle agit comme une métalloprotéase qui clive spécifiquement les chaînes de polyubiquitine liées par Lys-63 au sein du protéasome 26S, une activité de déubiquitinylation essentielle au traitement des substrats et au recyclage de l'ubiquitine. Références connexes : PMID:22909820

• Dans la réparation des dommages à l'ADN, la PSMD14 favorise la jonction d'extrémités non homologues (NHEJ) en éliminant la polyubiquitine liée par Lys-63, ce qui facilite la rétention de JMJD2A/KDM4A sur la chromatine et limite l'accumulation de TP53BP1 ; elle améliore également la recombinaison homologue en favorisant le chargement de RAD51. Références connexes : PMID:22909820

• En outre, la PSMD14 régule la macroautophagie en assurant le transport rétrograde de l'appareil de Golgi vers le réticulum endoplasmique grâce à son activité de déubiquitinylation, empêchant ainsi la mauvaise localisation des protéines essentielles à l'autophagie et permettant la formation correcte des autophagosomes. Références connexes : PMID:32210007

• La protéine est largement exprimée, avec des niveaux les plus élevés dans le cœur et les muscles squelettiques, ce qui reflète son rôle essentiel dans les fonctions cellulaires de base.

• Ses principales caractéristiques structurelles et fonctionnelles comprennent son domaine de métalloprotéase avec liaison au zinc et sa classification en tant que protéase à thiol ; il s'agit également d'une phosphoprotéine et d'un élément de la voie de conjugaison de l'ubiquitine.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène utilisé correspond aux acides aminés 160 à 300 de la PSMD14 humaine, une région prédite comme exposée et conservée entre les espèces, ce qui peut contribuer à la réactivité croisée de l'anticorps avec la souris et le rat.
• Pour le Western blot (WB), la bande attendue se situe à environ 35 kDa ; il est recommandé d'utiliser des contrôles de charge appropriés et de valider le signal avec des lysats traités par siRNA ou issus d'une extinction génique afin de confirmer la spécificité.
• En immunofluorescence/immunocytochimie (IF/ICC), inclure des contrôles négatifs, par exemple l'anticorps secondaire seul, et vérifier la localisation à l'aide de marqueurs d'organites, car la PSMD14 s'associe au protéasome dans les compartiments cytoplasmiques et nucléaires.
• Pour l'ELISA, réaliser des expériences de titration afin de déterminer les concentrations optimales de l'antigène de revêtement et de l'anticorps ; les performances de l'anticorps doivent être validées dans la matrice d'échantillon pertinente.

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