Anti-PSAP (Prosaposine) Anticorps Polyclonal de Lapin pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P07602

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation du PSAP (Prosaposine)

• La prosaposine (PSAP) est une glycoprotéine précurseur de 524 acides aminés qui est clivée de manière protéolytique dans les lysosomes pour générer quatre peptides saposines homologues (saposine A, B, C et D), qui servent de protéines activateurs non enzymatiques essentielles pour les hydrolases des sphingolipides.
• Les saposines facilitent la dégradation des glycosphingolipides en extrayant les substrats lipidiques des bicouches membranaires et en les présentant à leurs enzymes cognates ; la saposine B active l'arylsulfatase A, la bêta-galactosidase et l'alpha-galactosidase A, tandis que la saposine C active la glucocérébrosidase et la saposine D active l'acide céramidase.
• Au-delà de son rôle de cofacteur lysosomal, la prosaposine de pleine longueur présente des fonctions neurotrophiques et myélinotrophiques en signalant via les récepteurs couplés aux protéines G GPR37 et GPR37L1, favorisant la survie neuronale et la myélinisation.
• Le PSAP est exprimé de manière étendue, avec des niveaux élevés dans le cerveau, les reins et le foie, et se localise principalement dans la lumière lysosomale ; il est également sécrété et détecté dans les fluides extracellulaires, y compris le liquide céphalo-rachidien et le lait.
• Les mutations du PSAP sont associées à diverses maladies de surcharge lysosomale, notamment la maladie de Gaucher, la leucodystrophie métachromatique et la maladie de Krabbe, ainsi qu'à des formes complexes avec déficiences combinées en saposines ; des polymorphismes ont également été liés au risque de maladie de Parkinson.
• La protéine contient de multiples ponts disulfure intra-chaîne et des sites de glycosylation N-liés qui sont critiques pour sa stabilité, son traitement et son activation fonctionnelle. Le précurseur canonique de la prosaposine a une masse moléculaire calculée de 58,1 kDa ; une glycosylation extensive entraîne souvent des bandes à 65–70 kDa sur SDS-PAGE.

Conseils Expérimentaux et Astuces Techniques

• L'immunogène correspond aux résidus 275–524 du PSAP humain, couvrant les domaines des saposines C et D et le lien C-terminal ; l'anticorps polyclonal résultant devrait détecter à la fois le précurseur de pleine longueur et éventuellement les fragments traités des saposines C/D.
• Pour le Western blot, un SDS-PAGE standard en conditions réductrices est recommandé ; une bande prédominante d'environ 58 kDa est couramment observée dans les lysats de tissus humains, murins et de rat, représentant le précurseur de la prosaposine. Des bandes inférieures supplémentaires peuvent provenir du clivage protéolytique.
• Lors de la réalisation d'une immunofluorescence, une perméabilisation est nécessaire pour accéder à la localisation lysosomale ; une co-marquage avec un marqueur lysosomal (par exemple, LAMP1) est conseillé pour les études de colocalisation.
• Pour l'immunohistochimie sur coupes paraffinées, une récupération antigénique avec un tampon citrate (pH 6,0) améliore souvent le signal ; les tissus témoins positifs incluent le cerveau (cervelet, hippocampe) et le rein.
• Cet anticorps peut être utilisé en ELISA comme réactif de capture ou de détection lorsqu'il est associé à un anticorps monoclonal anti-PSAP approprié ; les dilutions optimales et les conditions de dosage doivent être déterminées empiriquement.

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