Anticorps polyclonal de lapin anti-POLR2A pour WB, IF/ICC, IP, ELISA - P24928

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de POLR2A

• POLR2A code pour la plus grande sous-unité (RPB1) de l'ARN polymérase II dirigée par l'ADN, l'enzyme responsable de la synthèse des précurseurs d'ARNm et de nombreux ARN non codants dans les cellules eucaryotes.
• RPB1 forme le cœur catalytique de la Pol II avec la deuxième plus grande sous-unité, RPB2. Elle contient un motif conservé DxDGD qui coordonne un ion Mg²⁺ essentiel pour l'addition des nucléotides lors de la polymérisation de l'ARN. Références associées : PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• L'enzyme passe par les cycles d'initiation, d'élongation et de terminaison de la transcription. Pendant l'initiation, la Pol II est recrutée sur les promoteurs contenant des éléments comme la boîte TATA ou les îlots CpG. Références associées : PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474
• RPB1 possède un domaine C-terminal unique (CTD) composé de 52 répétitions heptapeptidiques. Le CTD subit une phosphorylation dynamique (notamment sur les résidus Ser-2 et Ser-5) pour coordonner les étapes de la transcription et recruter les facteurs de maturation. Références associées : PMID:24207025, PMID:26124092
• En plus de son activité d'ARN polymérase dépendante de l'ADN, POLR2A peut agir comme une ARN polymérase dépendante de l'ARN, allongeant les ARN non codants et médiant la réplication du virus de l'hépatite delta.
• La protéine se localise principalement dans le noyau, mais se trouve également dans le cytoplasme et est associée aux chromosomes pendant la mitose.
• Des mutations dans POLR2A sont associées à des troubles du neurodéveloppement, notamment un déficit intellectuel (NEDHIB), soulignant son rôle essentiel dans l'expression des gènes.
• L'épissage alternatif et les modifications post-traductionnelles (acétylation, méthylation, ubiquitination, phosphorylation) diversifient davantage la fonction et la régulation de POLR2A.

Guide Expérimental et Conseils Techniques

• L'immunogène correspond à la région N-terminale (aa 1-260) de la POLR2A humaine, qui se situe en dehors du CTD répétitif. Cette conception peut conférer une spécificité pour le cœur de RPB1 par rapport au CTD hautement homologue trouvé dans certaines autres protéines.
• Il a été démontré que l'anticorps fonctionne en WB, IF/ICC, IP et ELISA. Lors de la réalisation d'un WB, notez le poids moléculaire prédit d'environ 217 kDa ; envisagez d'utiliser un gel SDS-PAGE à faible pourcentage et une optimisation rigoureuse du transfert pour une protéine aussi grande.
• Une réactivité croisée avec la souris et le rat est rapportée, suggérant que l'épitope est conservé entre ces espèces. Validez dans votre système modèle spécifique pour le confirmer.
• Pour l'IF/ICC, une coloration nucléaire et périnucléaire est attendue compte tenu de la localisation de POLR2A ; cependant, le bruit de fond peut varier en fonction des conditions de fixation et de perméabilisation.
• Dans les expériences d'IP, assurez-vous que le tampon de lyse est compatible avec l'extraction des protéines nucléaires pour solubiliser efficacement les complexes de la Pol II.

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