mAb de lapin anti-POLR2A (extrémité N-terminale) pour WB, IP, ChIP, ELISA - P24928

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de POLR2A

• POLR2A code pour la plus grande sous-unité catalytique de l'ARN polymérase II (Pol II), qui synthétise les précurseurs d'ARNm et de nombreux ARN non codants fonctionnels en utilisant les nucléosides triphosphates comme substrats. Références associées : PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596

• Pendant l'initiation de la transcription, la Pol II est recrutée sur les promoteurs d'ADN, et POLR2A forme le centre actif avec POLR2B, apportant un motif DxDGD coordonnant le Mg²⁺ essentiel à l'ajout de nucléotides. Références associées : PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474, PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112

• Le domaine C-terminal unique (CTD) est constitué de 52 répétitions d'heptapeptides et sert de plateforme pour l'assemblage des facteurs régulant l'initiation, l'élongation et la terminaison de la transcription, ainsi que le traitement co-transcriptionnel. Références associées : PMID:24207025, PMID:26124092

• POLR2A présente une activité intrinsèque de relecture par exonucléase 3'→5', permettant l'élimination des nucléotides mal incorporés par retour en arrière et clivage de la liaison phosphodiester. Références associées : PMID:8381534

• La phosphorylation du CTD sur la sérine 5 médie l'échappement du promoteur, tandis que la phosphorylation sur la sérine 2 est requise pour la libération de la pause pendant l'élongation ; la méthylation et l'acétylation des lysines du CTD ajustent finement les niveaux d'expression génique. Références associées : PMID:24207025, PMID:26124092

• Au-delà de la transcription dépendante de l'ADN, POLR2A peut fonctionner comme une ARN polymérase dépendante de l'ARN, prolongeant les ARN non codants et répliquant le génome du virus de l'hépatite delta pendant l'infection. Références associées : PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596

• La protéine se localise dans le noyau, le cytoplasme et les chromosomes, reflétant ses rôles dynamiques dans la transcription et le traitement de l'ARN.

• L'épissage alternatif génère plusieurs isoformes, et des variants associés à des maladies au niveau de POLR2A ont été liés à des troubles du neurodéveloppement (par exemple, le NEDHIB).

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• La cible de l'immunogène (aa 550-650) se situe dans la région N-terminale et est conservée chez l'homme, la souris et le rat, ce qui explique la réactivité croisée observée ; prévoyez un alignement de séquence pour les autres espèces.
• Pour le Western blot, attendez une bande proche de 217 kDa ; utilisez un gel SDS-PAGE à faible pourcentage (par exemple 6 %) et optimisez les conditions de transfert pour les protéines de haut poids moléculaire.
• Pour l'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), validez la spécificité de l'anticorps avec des loci génomiques positifs et négatifs, et optimisez les protocoles de réticulation et de cisaillement en raison de la grande taille du complexe Pol II.
• Pour l'immunoprécipitation (IP), des conditions de lyse douces et l'ajout d'un traitement à la nucléase peuvent améliorer la solubilité de POLR2A liée à la chromatine.
• L'anticorps est également adapté pour l'ELISA ; prévoyez de l'associer à un anticorps de capture pour la détection en sandwich des complexes natifs de Pol II.

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