Anticorps Polyclonal Anti-PMEL pour WB, IF/ICC, ELISA - P40967

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation du PMEL

• Le PMEL (également connu sous le nom de gp100, Pmel17, SILV, ME20) est une glycoprotéine transmembranaire de type I spécifique aux mélanocytes qui joue un rôle central dans la biogenèse des mélanosomes. C'est le précurseur des fibrilles amyloïdes physiologiques au sein des mélanosomes.
• La protéine subit un traitement protéolytique hautement régulé ; ses fragments amyloïdogènes s'assemblent en feuillets fibrillaires parallèles qui entraînent l'élongation des prémélanosomes de stade I en mélanosomes striés et ellipsoïdaux de stade II.
• Dans les mélanosomes matures pigmentés de stade III et IV, la matrice amyloïde sert d'échafaudage pour la polymérisation de l'eumélanine, concentrant les précurseurs et séquestrant possiblement des intermédiaires toxiques.
• La localisation subcellulaire s'étend sur plusieurs compartiments : elle se trouve dans la membrane du réticulum endoplasmique, l'appareil de Golgi, la membrane du réseau cis-Golgi, les endosomes (corps multivésiculaires), les mélanosomes et les vésicules extracellulaires sécrétées.
• Le PMEL est reconnu comme un antigène tumoral spécifique du mélanome. Parmi ses auto-peptides non mutés, les épitopes restreints par HLA-A2 tels que G9-154 (KTWGQYWQV), G9-209 (ITDQVPFSV) et G9-280 (YLEPGPVTA) sont immunodominants et peuvent stimuler des réponses des lymphocytes T cytotoxiques.
• Il est normalement exprimé à de faibles niveaux dans les mélanocytes adultes quiescents mais est fortement surexprimé dans les mélanocytes néonataux en prolifération et pendant la croissance tumorale, en particulier dans les mélanomes malins. Une certaine expression est également trouvée dans les nævi dysplasiques.
• Les modifications post-traductionnelles incluent une glycosylation extensive (glucides contenant de l'acide sialique), la formation de ponts disulfures et le clivage sur des paires de résidus basiques. La protéine mature contient un peptide signal, une hélice transmembranaire et des répétitions luminales/extracellulaires.

Conseils Expérimentaux et Techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 320–430 dans le domaine extracellulaire du PMEL humain, une région probablement exposée et adaptée pour la reconnaissance de la protéine entière et des fragments traités.
• Pour le Western blot, confirmez la bande attendue de la protéine entière à environ 70 kDa ; des bandes inférieures supplémentaires représentant des fragments amyloïdogènes clivés (ex: Mα, Mβ) peuvent être observées dans les extraits de cellules mélanocytaires.
• En immunofluorescence/ICC, la localisation dans les mélanosomes peut être validée en utilisant des lignées cellulaires de mélanome (ex: SK-MEL-28, Mel-624) ou des mélanocytes primaires ; un marquage conjoint avec des marqueurs de mélanosomes est conseillé.
• Les applications ELISA doivent être optimisées en utilisant du PMEL recombinant ou des lysats cellulaires ; en raison de la nature polyclonale, cet anticorps peut offrir une sensibilité élevée mais nécessite une titration soigneuse.
• La réactivité croisée avec le PMEL de souris et de rat est déclarée ; cependant, nous recommandons de vérifier la réactivité dans l'espèce et le contexte tissulaire spécifiques avant des études à grande échelle.

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