Anticorps monoclonal Anti-PMEL (gp100) pour WB, IHC-P, ELISA - P40967

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du PMEL

• La protéine des mélanocytes PMEL (également connue sous le nom de gp100, HMB-45 ou SILV) est une protéine prémélanosomique qui joue un rôle central dans la morphogenèse des mélanosomes et la pigmentation.
• Lors de la maturation des mélanosomes, les fragments amyloïdogènes traités du PMEL s'assemblent en feuillets fibrillaires parallèles, favorisant l'élongation des prémélanosomes de stade I en mélanosomes ellipsoïdaux striés de stade II.
• Dans les mélanosomes pigmentés de stade III et IV, la matrice amyloïde sert de plate-forme pour concentrer les précurseurs d'eumélanine, facilitant une synthèse efficace de la mélanine tout en séquestrant potentiellement des intermédiaires de réaction toxiques.
• Le PMEL est un antigène spécifique au mélanome bien caractérisé ; les peptides immunodominants dérivés du PMEL, tels que G9-154 (KTWGQYWQV) et G9-209 (ITDQVPFSV), sont présentés par les molécules HLA-A et stimulent les réponses des lymphocytes T cytotoxiques anti-tumoraux.
• À l'échelle subcellulaire, le PMEL se localise à la membrane du réticulum endoplasmique, à l'appareil de Golgi, à la membrane du réseau cis-Golgi, aux endosomes (corps multivésiculaires) et aux mélanosomes, et se retrouve également dans les vésicules extracellulaires et les formes sécrétées.
• La protéine subit des modifications post-traductionnelles étendues, notamment un clivage sur des paires de résidus basiques, la formation de ponts disulfures, la glycosylation et l'ajout d'acide sialique.
• Normalement exprimée à de faibles niveaux dans les mélanocytes adultes quiescents, la protéine PMEL est surexprimée par les mélanocytes néonataux en prolifération et pendant la croissance tumorale, en particulier dans les mélanomes et certains naevus dysplasiques.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène correspond à la région N-terminale (aa 25-211) du PMEL humain, qui est prédite comme étant extracellulaire/luminale ; à prendre en compte lors de la conception de stratégies de détection ou du couplage avec d'autres anticorps.
• Pour le Western blot, le PMEL non traité de pleine longueur migre à environ 70 kDa, mais notez que le PMEL endogène est traité protéolytiquement en plusieurs fragments ; validez le profil de bandes attendu dans vos lysats.
• En immunohistochimie (paraffine), la coloration du PMEL doit être membranaire/cytoplasmique dans les mélanocytes et les cellules de mélanome ; incluez des témoins positifs (tissu de mélanome) et négatifs appropriés.
• Pour les applications ELISA, utilisez la protéine PMEL recombinante ou des peptides synthétiques comme antigènes de capture et titrez soigneusement l'anticorps pour obtenir un rapport signal/bruit optimal.
• Puisque l'expression du PMEL peut varier en fonction de l'état d'activation des mélanocytes, envisagez d'utiliser des lignées cellulaires de mélanome connues (par exemple, SK-MEL-28) ou des mélanocytes primaires comme témoins positifs.

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