Anticorps polyclonal anti-PLK3 pour WB, ELISA - Q9H4B4

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de PLK3

• Identité et famille protéique : La sérine/thréonine-protéine kinase PLK3 (également connue sous le nom de cytokine-inducible serine/thréonine-protéine kinase, FGF-inducible kinase, proliferation-related kinase) est un membre de la famille des polo-like kinases. Elle contient un domaine catalytique et des domaines POLO box qui médient la reconnaissance du substrat par liaison dépendante de la phosphorylation.
• Régulation du cycle cellulaire : PLK3 est nécessaire pour l'entrée en phase S et la cytokinèse. Elle régule le point de contrôle G2 et la progression mitotique en phosphorylant CDC25C et BCL2L1, influençant les transitions du cycle cellulaire.
• Réponse au stress et dommages à l'ADN : PLK3 est rapidement activée en réponse à des stimuli de stress tels que les rayonnements ionisants, les espèces réactives de l'oxygène (ROS), le stress hyperosmotique, l'irradiation UV et l'hypoxie. Elle phosphoryle p53/TP53 pour promouvoir l'apoptose, CHEK2 pour renforcer le point de contrôle G2/M, et p73/TP73 pour inhiber ses fonctions pro-apoptotiques.
• Cibles de phosphorylation clés : Les substrats de PLK3 incluent ATF2, BCL2L1, CDC25A, CDC25C, CHEK2, HIF1A, JUN, p53/TP53, p73/TP73, PTEN, TOP2A et VRK1. Ces interactions médient ses rôles dans le contrôle des points de contrôle, l'apoptose et la dynamique du Golgi.
• Démantèlement de l'appareil de Golgi : PLK3 participe à la fragmentation du Golgi pendant la mitose via une voie dépendante de MEK1/MAP2K1 en phosphorylant VRK1 au niveau de l'appareil de Golgi, assurant une partition correcte des organites.
• Localisation subcellulaire : PLK3 présente une localisation dynamique dans le cytoplasme, le noyau, le nucléole, l'appareil de Golgi et le centrosome, ce qui correspond à ses fonctions multifacettes dans le cycle cellulaire et la signalisation du stress.
• Expression tissulaire et différentielle : Les transcrits sont fortement détectés dans le placenta, le poumon, le muscle squelettique, le cœur, le pancréas, les ovaires et le rein ; faiblement dans le foie et le cerveau. Dans les cellules hématopoïétiques, PLK3 est fortement et spécifiquement exprimée dans les macrophages terminaux différenciés. Son expression est régulée à la baisse dans les tumeurs pulmonaires primaires.
• Modifications post-traductionnelles et mots-clés : PLK3 est classée comme une phosphoprotéine (identification protéomique) avec une activité de liaison à l'ATP et une activité sérine/thréonine-protéine kinase. Les mots-clés UniProt incluent apoptose, cycle cellulaire, dommages à l'ADN, appareil de Golgi et protéome de référence.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène couvre les acides aminés 487–646 (région C-terminale), couvrant une partie du second domaine POLO box. Cette région peut offrir une spécificité au sein de la famille PLK ; la réactivité croisée avec PLK1 ou PLK2 doit être confirmée expérimentalement si nécessaire.
• Pour le Western blot (WB), le poids moléculaire prédit est d'environ 72 kDa. Validez la détection dans l'espèce et le type d'échantillon prévus (humain, souris, rat). Utilisez des contrôles de charge appropriés et envisagez des lysats de knockdown ou knockout par siRNA pour vérifier l'identité de la bande.
• Les applications ELISA peuvent être optimisées en testant les conditions de revêtement et les dilutions d'anticorps ; l'anticorps est fourni sous forme polyclonale de lapin, adapté aux protocoles ELISA indirects standard.
• Pour étudier les voies induites par le stress, traitez les cellules avec des agents endommageant l'ADN (par exemple, étoposide, UV), des inducteurs de ROS (par exemple, H₂O₂) ou des mimétiques de l'hypoxie (par exemple, CoCl₂) et confirmez l'activation ou les changements d'expression de PLK3 par WB.
• Pour l'immunofluorescence ou l'immunohistochimie, les utilisateurs doivent établir des conditions de fixation et de perméabilisation compatibles avec les compartiments subcellulaires détectés (cytoplasmique, nucléaire, Golgi). Notez que les niveaux endogènes de PLK3 peuvent être faibles dans certains types cellulaires ; un enrichissement ou une amplification du signal peut être nécessaire.

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