Anticorps monoclonal anti-PKM2 pour WB, IF/ICC, IP, ELISA - P14618

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la PKM2

• La PKM2 catalyse l'étape limitante finale de la glycolyse en transférant un groupe phosphoryle du phosphoénolpyruvate (PEP) à l'ADP, générant de l'ATP. L'activité de l'enzyme est régulée par un équilibre dynamique entre un tétramère très actif et un dimère presque inactif, déterminant le devenir des carbones du glucose vers la production d'énergie ou la biosynthèse. Références associées : PMID:15996096 PMID:1854723 PMID:20847263
• Le gène PKM génère deux isoformes majeures par épissage alternatif : l'isoforme adulte M1 (PKM1) et l'isoforme embryonnaire M2 (PKM2). La PKM2 possède une faible activité intrinsèque de pyruvate kinase et nécessite une activation allostérique par le D-fructose 1,6-bisphosphate (FBP), tandis que la PKM1 est constitutivement active. Références associées : PMID:18337823 PMID:20847263
• En plus de son rôle métabolique cytoplasmique, la PKM2 fonctionne comme une protéine kinase nucléaire. Suite à des stimuli tels que l'activation du récepteur de l'EGF, la PKM2 se transloque dans le noyau et phosphoryle des cibles incluant STAT3 sur Tyr-705 et l'histone H3 sur Thr-11, favorisant la transcription de gènes impliqués dans la prolifération cellulaire, l'angiogenèse (par ex., VEGFA) et la tumorigenèse. Références associées : PMID:18191611 PMID:21620138 PMID:22056988 PMID:22306293 PMID:22901803 PMID:24120661 PMID:33314660 PMID:26787900 PMID:17308100
• La PKM2 est principalement exprimée dans les cellules hautement prolifératives, y compris les cellules souches embryonnaires, les cellules de carcinome embryonnaire et les cellules cancéreuses, ce qui en fait un biomarqueur tumoral bien établi. L'isoforme adulte PKM1 est exprimée dans les tissus adultes normaux et est généralement absente des tumeurs. Références associées : PMID:18337823
• La PKM2 se localise à la fois dans le cytoplasme et le noyau. Sa translocation nucléaire est induite par diverses voies de signalisation et est cruciale pour ses fonctions non métaboliques et oncogéniques.
• Des modifications post-traductionnelles telles que l'acétylation, la phosphorylation, l'hydroxylation et la méthylation régulent étroitement l'activité métabolique de la PKM2, sa stabilité protéique et son import nucléaire, reliant l'état métabolique cellulaire aux réseaux de signalisation.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique couvrant les acides aminés 380–480 de la PKM2 humaine (NP_002645.3), qui se situe dans la région C-terminale unique qui distingue la PKM2 de l'isoforme M1. Cette conception suggère une haute spécificité pour la PKM2 par rapport à la PKM1.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire prédit de la PKM2 est d'environ 58 kDa. Validez les performances de l'anticorps en utilisant des contrôles positifs appropriés (par ex., lignées cellulaires cancéreuses humaines) et envisagez d'optimiser la dilution de l'anticorps primaire et les temps d'exposition.
• En immunofluorescence/immunocytochimie (IF/ICC), testez différents protocoles de fixation et de perméabilisation pour préserver la localisation de la PKM2, car elle peut être à la fois cytoplasmique et nucléaire.
• Pour l'immunoprécipitation (IP), utilisez des conditions de lyse natives pour maintenir les complexes protéiques et confirmez l'efficacité de capture de la cible.
• Lors de la réalisation d'ELISA, établissez des courbes standard avec la protéine PKM2 recombinante et validez la sensibilité et la spécificité dans la matrice d'échantillon pertinente.
• Une réactivité croisée avec la PKM2 de souris et de rat est indiquée ; vérifiez la reconnaissance de la cible dans votre système expérimental spécifique en utilisant des contrôles spécifiques à l'espèce.

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