Anticorps polyclonal de lapin anti-PKM1/2 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P14618

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de PKM1/2

• Catalyse l'étape finale limitante de la glycolyse en transférant un groupe phosphoryle du phosphoénolpyruvate (PEP) à l'ADP, générant de l'ATP.
  Références associées :
  PMID:15996096 | PMID:1854723 | PMID:20847263
• Le rapport entre la forme tétramérique hautement active et la forme dimérique presque inactive détermine si les carbones du glucose sont orientés vers des processus biosynthétiques ou utilisés pour la production d'ATP glycolytique, un commutateur essentiel à la prolifération et à la survie des cellules tumorales.
  Références associées :
  PMID:15996096 | PMID:1854723 | PMID:20847263
• L'isoforme M2 (PKM2), prédominante au cours de l'embryogenèse et dans les tumeurs, présente une faible activité basale de pyruvate kinase et nécessite une activation allostérique par le D-fructose-1,6-bisphosphate. Au-delà de son rôle métabolique, PKM2 est transloquée vers le noyau en réponse à des signaux, où elle agit comme une protéine kinase, phosphorylant STAT3 au niveau de Tyr-705 et l'histone H3 au niveau de Thr-11 afin d'activer la transcription de gènes tels que VEGFA et CD274, favorisant l'angiogenèse et l'évasion immunitaire.
  Références associées :
  PMID:18337823 | PMID:20847263 | PMID:18191611 | PMID:21620138 | PMID:22056988 | PMID:22306293 | PMID:22901803 | PMID:24120661 | PMID:33314660 | PMID:26787900
• L'isoforme M1 (PKM1), exprimée dans les tissus adultes, présente une activité constitutive élevée de pyruvate kinase, indépendante des activateurs allostériques, et remplace fonctionnellement M2 après la naissance.
  Références associées :
  PMID:18337823 | PMID:20847263
• La localisation subcellulaire est dynamique : PKM1/2 se trouve principalement dans le cytoplasme, mais, dans le cas de PKM2, divers stimuli tels que l'EGF déclenchent sa translocation nucléaire, où l'homodimérisation permet ses fonctions de protéine kinase.
  Références associées :
  PMID:22056988 | PMID:22306293 | PMID:22901803
• Spécificité tissulaire : PKM2 est spécifiquement enrichie dans les cellules en prolifération, notamment les cellules souches embryonnaires et les cellules cancéreuses, tandis que PKM1 est présente dans de nombreux tissus adultes, mais est notamment absente des cellules tumorales.
  Références associées :
  PMID:18337823
• Les modifications post-traductionnelles, notamment l'acétylation, la phosphorylation, l'hydroxylation et l'ubiquitination, ajustent finement l'activité, la stabilité et le transport subcellulaire de PKM1/2, soulignant son rôle de centre de régulation du métabolisme et de la signalisation.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène couvre les résidus 11–221 de PKM1/2 (NP_001193728.1), une région conservée entre PKM1 et PKM2 ; les chercheurs doivent valider la spécificité de l'isoforme dans leur système expérimental.
• Pour le Western blot (WB), une bande d'environ 58 kDa est attendue. Inclure des lysats témoins positifs et négatifs appropriés (par exemple, tissu cancéreux par rapport à un tissu normal) afin de confirmer la réactivité.
• En immunohistochimie (IHC-P), il est recommandé d'optimiser la récupération antigénique et la dilution de l'anticorps pour les coupes fixées au formol et incluses en paraffine.
• Pour l'immunofluorescence (IF/ICC), optimiser la fixation et la perméabilisation afin de préserver la localisation cytoplasmique/nucléaire duale de PKM2 en réponse à des stimuli spécifiques.
• Pour les applications ELISA, déterminer empiriquement la concentration optimale de l'anticorps et les conditions de revêtement en utilisant des protocoles indirects ou sandwich standard.

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