Anticorps polyclonal de lapin anti-PKACα pour WB et ELISA - P17612

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de la PKACα

• La PKACα (PRKACA) est la sous-unité catalytique alpha de la protéine kinase dépendante de l’AMPc. Deux isoformes existent : l’isoforme 1 ubiquitaire et l’isoforme 2 spécifique des spermatozoïdes, enrichie dans les spermatocytes pachytènes.
• Elle phosphoryle de nombreux substrats cytoplasmiques et nucléaires, notamment CDC25B, ABL1, NFKB1, l’histone H1.4 et VASP, régulant ainsi le cycle cellulaire, la transcription et la motilité. Références associées : PMID:15642694, PMID:15905176, PMID:16387847
• Dans les plaquettes, la PKACα forme un complexe avec NF-κB et IκBα afin de maintenir la quiescence ; la stimulation par un agoniste dissocie le complexe, libérant la PKACα qui peut alors phosphoryler VASP et favoriser l’agrégation. Références associées : PMID:15642694, PMID:20356841
• La PKACα inhibe la signalisation de Smoothened en phosphorylant les facteurs de transcription GLI (GLI1/2/3), ce qui déclenche leur maturation et bloque l’expression des gènes cibles en l’absence de ligands Hedgehog. Références associées : PMID:16705181
• La séquestration de la PKACα par le récepteur Smoothened au niveau de la membrane cellulaire empêche la phosphorylation de GLI, permettant ainsi l’activation de la voie. Références associées : PMID:36202993, PMID:39138140
• La PKACα potentialise l’activité du canal calcique RYR2, modifiant la dynamique de libération du calcium et contribuant à la libération de Ca²⁺ induite par la surcharge des réserves. Références associées : PMID:17693412
• Elle régule négativement mTORC1 en phosphorylant RPTOR, établissant un lien entre la signalisation de l’AMPc et la détection des nutriments. Références associées : PMID:31112131
• Au niveau subcellulaire, la PKACα se trouve dans le cytoplasme, le noyau, la membrane cellulaire, les mitochondries et les projections cellulaires (cils/flagelles), ce qui reflète la diversité de ses fonctions.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène correspond à une région conservée (acides aminés 251-351) au sein du domaine catalytique ; une réactivité croisée avec d’autres sous-unités catalytiques de la PKA (PRKACB, PRKACG) est possible. Il convient donc de vérifier la spécificité dans votre système.
• En Western blot, une bande principale d’environ 39-40 kDa est attendue ; des bandes supplémentaires peuvent correspondre à des isoformes ou à des produits de dégradation. Utilisez des contrôles positifs et négatifs appropriés.
• Pour l’ELISA, ajustez les concentrations de l’antigène de revêtement et de l’anticorps afin d’optimiser le rapport signal/bruit ; envisagez l’utilisation d’un fragment recombinant de PKACα comme étalon.
• Compte tenu de son rôle dans plusieurs voies de signalisation, traitez les échantillons avec des inhibiteurs de phosphatases afin de préserver les interactions dépendantes de la phosphorylation lorsque vous étudiez ces contextes.

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