Anticorps polyclonal de lapin anti-PIKFYVE pour WB, ELISA - Q9Y2I7

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de PIKFYVE

• PIKFYVE, également connue sous le nom de PIP5K3, est une kinase lipidique et protéique à sérine de double spécificité qui constitue l'unique enzyme responsable de la synthèse du phosphatidylinositol 3,5-bisphosphate (PtdIns(3,5)P2) à partir du phosphatidylinositol 3-phosphate (PubMed:17556371, PubMed:41639454). Références associées : PMID:17556371 | PMID:41639454
• La protéine contient un domaine doigt de zinc FYVE N-terminal qui la cible vers les membranes endosomales, où elle se localise principalement sur les endosomes précoces et tardifs, les phagosomes et les vésicules cytoplasmiques.
• PIKFYVE est un régulateur essentiel de l'homéostasie des endomembranes, contrôlant la fission, la fusion et la maturation des endosomes ; elle est indispensable à la transition des endosomes précoces aux endosomes tardifs et à la fonction lysosomale (PubMed:30612035, PubMed:22621786). Références associées : PMID:30612035 | PMID:22621786
• Grâce à son activité de kinase lipidique, PIKFYVE régule l'autophagie, la maturation des vacuoles et la récupération des nutriments en facilitant le recyclage du contenu lysosomale vers le réseau des endosomes (PubMed:27623384). Références associées : PMID:27623384
• La kinase joue également un rôle dans la signalisation de l'insuline et la translocation de GLUT4, contribuant ainsi à l'homéostasie glucidique systémique (Par similarité).
• Dans les cellules immunitaires, PIKFYVE est nécessaire à la fusion phagosome-lysosome, la génération de ROS et la présentation antigénique par le CMH de classe II, des processus vitaux pour l'immunité innée et adaptative (PubMed:28779020, PubMed:30612035). Références associées : PMID:28779020 | PMID:30612035
• L'autophosphorylation de PIKFYVE régule négativement son activité de kinase lipidique et stimule la phosphatase lipidique FIG4, créant une boucle de régulation qui ajuste finement les niveaux de PtdIns(3,5)P2 (PubMed:33098764). Références associées : PMID:33098764
• Il est à noter que l'enzyme est détournée par les coronavirus tels que le SARS-CoV et le SARS-CoV-2 pour faciliter leur entrée cellulaire par endocytose.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Étant donné que l'immunogène couvre les acides aminés 269 à 545 de la PIKFYVE humaine, on s'attend à ce que l'anticorps reconnaisse la protéine endogène dans les échantillons humains, de souris et de rat. Pour le Western blotting, notez le poids moléculaire élevé (~237 kDa) : utilisez un gel d'acrylamide à faible pourcentage (par exemple 6 à 8 %) et des temps de transfert prolongés pour garantir un transfert protéique efficace.
• Pour l'ELISA, cet anticorps peut être utilisé comme réactif de capture ou de détection pour la protéine PIKFYVE recombinante ; confirmez les concentrations de revêtement optimales de manière empirique.
• Envisagez d'inclure des contrôles positifs et négatifs appropriés, tels que des lysats de cellules avec une expression connue de PIKFYVE, et validez l'anticorps dans votre système expérimental.

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