Anticorps polyclonal de lapin Anti-PI4KA pour WB, IF/ICC, ELISA - P42356

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de PI4KA

• PI4KA (Phosphatidylinositol 4-kinase alpha), également appelée PIK4CA ou PI4K-ALPHA, est une lipide kinase qui catalyse la phosphorylation du phosphatidylinositol en phosphatidylinositol 4-phosphate, première étape déterminante dans la formation du second messager inositol-1,4,5-trisphosphate.
• Cet enzyme joue un rôle central dans les voies de signalisation des phosphoinositides, régulant le trafic membranaire, la prolifération cellulaire et l'homéostasie calcique intracellulaire.
• Plusieurs isoformes existent grâce à l'épissage alternatif ; l'isoforme canonique est une grande protéine d'un poids moléculaire d'environ 237 kDa.
• PI4KA est principalement localisée dans le cytoplasme et la membrane cellulaire, où elle s'associe à la membrane plasmique pour exercer son activité kinase.

L'expression tissulaire est ubiquitaire, avec les niveaux les plus élevés dans le placenta et le cerveau ; l'expression est faible ou absente dans le poumon, le foie, le pancréas, les testicules et les leucocytes.

• La protéine contient un domaine de liaison à l'ATP et un domaine de kinase lipidique, et son activité est régulée par phosphorylation.
• Les mutations de PI4KA sont associées à la paraplégie spastique héréditaire (SPG84) et d'autres troubles neurologiques, ce qui démontre son importance pour la fonction neuronale.
• Les mots-clés d'UniProt incluent : épissage alternatif, liaison à l'ATP, variant pathologique, paraplégie spastique héréditaire, kinase, métabolisme lipidique, membrane, neurodégénérescence et phosphoprotéine.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond à la région C-terminale (aa 1780-1860) ; l'anticorps peut reconnaître les épitopes de ce segment, garantissant la détection de la PI4KA pleine longueur.
• En raison de la grande taille de la protéine (237 kDa), utilisez un gel SDS-PAGE à faible pourcentage (par exemple 6-8%) et des temps de transfert prolongés pour le Western blot.
• Pour l'immunofluorescence/ICC, optimisez les conditions de fixation et de perméabilisation ; du Triton X-100 ou de la digitonine peuvent être utilisés pour détecter la PI4KA associée à la membrane.
• Validez la spécificité de l'anticorps dans les lignées cellulaires concernées (par exemple HeLa, SH-SY5Y) ou les tissus connus pour exprimer PI4KA, et incluez un contrôle négatif tel que des lysats de poumon ou de foie où l'expression est faible.
• Pour l'ELISA, envisagez d'utiliser un fragment recombinant de PI4KA comme étalon pour établir la sensibilité et la plage linéaire du test.

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