Anticorps polyclonal de lapin anti-PI3 Kinase p85 bêta pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - O00459

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de la PI3 Kinase p85 bêta

• Codée par le gène PIK3R2, la PI3 Kinase p85 bêta (sous-unité régulatrice bêta de la phosphatidylinositol 3-kinase) est une sous-unité régulatrice de 85 kDa de la PI3K de classe IA.
• Elle s’associe à la sous-unité catalytique p110 pour former une PI3K active, qui phosphoryle le PtdIns(4,5)P2 afin de produire le second messager PIP3 au niveau de la membrane plasmique.
• Le PIP3 recrute des protéines contenant un domaine PH, telles qu’AKT1 et PDPK1, activant des cascades de signalisation qui stimulent la croissance, la survie, la prolifération, la motilité et la morphologie cellulaires.
• Par l’intermédiaire de son domaine SH2, la p85 bêta se lie aux tyrosine kinases protéiques phosphorylées (par exemple, aux récepteurs de facteurs de croissance activés), agissant comme adaptateur pour localiser la sous-unité catalytique p110 sur la membrane.
• Il a été démontré qu’elle régule indirectement l’autophagie (PubMed:23604317). Références associées : PMID:23604317
• La p85 bêta favorise la translocation nucléaire de l’isoforme 2 de XBP1 en situation de stress du RE et/ou de stimulation par l’insuline dans le foie, contribuant ainsi à l’amélioration de la tolérance au glucose.
• La protéine contient des domaines SH2 et SH3, est phosphorylée lors de l’activation de la PI3K et peut subir une conjugaison à l’ubiquitine ; des mutations sont associées à des variants pathologiques.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène correspond à la région N-terminale (aa 1–85) de la p85 bêta humaine ; cette région peut être moins conservée, ce qui pourrait conférer une spécificité d’isoforme, mais une réactivité croisée avec la p85 alpha doit être envisagée et validée dans le système d’échantillon concerné.
• Pour la WB, utiliser des lysats de cellules entières provenant de lignées cellulaires ou de tissus humains, de souris ou de rat ; la bande attendue est d’environ 82 kDa. Il est recommandé d’utiliser un contrôle positif (par exemple, un lysat HeLa ou NIH/3T3).
• L’IHC-P et l’IF/ICC peuvent nécessiter une optimisation de la récupération antigénique (tampon citrate chauffé, pH 6,0) et de la perméabilisation (Triton X-100 à 0,1 %). Valider la spécificité du signal à l’aide d’un peptide bloquant ou de contrôles knockout.
• En ELISA, cet anticorps peut être utilisé comme réactif de capture ou de détection ; son association avec un anticorps de détection approprié dirigé contre la p85 bêta est nécessaire pour les dosages quantitatifs.
• Étant donné que la p85 bêta est une protéine intracellulaire exprimée de manière ubiquitaire, assurer une fixation et une perméabilisation adéquates pour l’IF/ICC, et envisager une co-coloration avec des marqueurs spécifiques des compartiments afin de confirmer sa localisation.

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