Anticorps Polyclonal de Lapin Anti-Phospho-ZAP70 (Y493) pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P43403

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de ZAP70

• ZAP70 (protéine associée à la chaîne zêta de 70 kDa) est une tyrosine kinase cytoplasmique essentielle à la régulation immunitaire adaptative, médiant la signalisation du récepteur des cellules T (TCR) après présentation de l'antigène (PubMed:7509083). Références associées : PMID:7509083
• La protéine contient des domaines SH2 en tandem qui se lient aux motifs ITAM phosphorylés sur les chaînes CD3, levant l'auto-inhibition et permettant la phosphorylation par LCK au niveau de Tyr493 pour une activation complète.
• Une fois activée, ZAP70 phosphoryle les adaptateurs clés LAT et LCP2, déclenchant des cascades en aval qui régulent la prolifération des cellules T, la production de cytokines et la réorganisation du cytosquelette.
• ZAP70 est impliquée dans le développement des thymocytes, favorisant la survie et la progression du cycle cellulaire des cellules double-négatives CD4/CD8 avant la sélection positive.
• Elle contribue également au développement et à l'activation des lymphocytes B via la signalisation du récepteur des cellules B, soulignant des rôles lymphoïdes plus larges.
• La localisation subcellulaire est principalement cytoplasmique, avec un recrutement à la membrane plasmique lors de l'engagement du TCR ; elle participe également à l'internalisation du TCR via l'ubiquitination médiée par CBL.
• Exprimée principalement dans les cellules T, les cellules tueuses naturelles (NK), les thymocytes précoces et les pro/pré-cellules B. Les défauts génétiques causent un déficit immunitaire combiné sévère (SCID) et des maladies auto-immunes.
• Les modifications post-traductionnelles incluent la phosphorylation de tyrosine, l'acétylation et l'ubiquitination, essentielles pour sa régulation dynamique.

Guide expérimental et conseils techniques

• En tant qu'anticorps phospho-spécifique ciblant Tyr493, assurez-vous que les échantillons sont traités avec des inhibiteurs de phosphatases pendant la lyse et envisagez un traitement par phosphatase comme contrôle négatif.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire prédit est d'environ 70 kDa ; utilisez un pourcentage de gel approprié (par exemple, 8-10 %) pour une résolution optimale.
• Validez la spécificité de l'anticorps dans votre système modèle en utilisant une compétition par peptide ou des approches de knockdown/knockout génétique.
• Pour l'immunohistochimie (IHC-P), une récupération antigénique peut être nécessaire ; testez des tampons de récupération à pH 6 ou pH 9.
• En immunofluorescence (IF/ICC), surveillez la localisation membranaire après stimulation ; les conditions de perméabilisation et de fixation doivent être optimisées.
• Les applications ELISA et autres peuvent nécessiter une titration pour déterminer la concentration de travail optimale.

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