Anticorps Polyclonal de Lapin Anti-Phospho-Zap70-Y319+Syk-Y352 pour WB, IF/ICC, ELISA - P43403/P43405

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de ZAP70

• ZAP70 (protéine associée à la chaîne zêta de 70 kDa) est une tyrosine kinase cytoplasmique appartenant à la famille Syk, également connue sous le nom de tyrosine kinase liée à Syk (SRK).
• Essentielle pour la signalisation du récepteur des cellules T (TCR) : lors de l'engagement du TCR, ZAP70 est recrutée vers les motifs ITAM phosphorylés des chaînes CD3, où elle est phosphorylée et activée par LCK, initiant des cascades de signalisation en aval. Références connexes : PMID:7509083
• La ZAP70 activée phosphorylie les protéines adaptatrices LAT et LCP2, déclenchant un réseau de signalisation qui régule l'activation, la prolifération, la production de cytokines et la différenciation des cellules T.
• En plus de la signalisation du TCR, ZAP70 contrôle l'adhésion, la motilité et la réorganisation du cytosquelette des cellules T ; elle médie également l'internalisation et la dégradation du TCR via par interaction avec CBL, SLA et SLA2, modulant ainsi les niveaux de TCR de surface.
• ZAP70 contribue également au développement et à l'activation des cellules B par la signalisation du récepteur des cellules B (BCR).
• Lors du développement des thymocytes, ZAP70 favorise la survie et la progression du cycle cellulaire des thymocytes double négatifs CD4/CD8 avant la sélection positive.
• Localisation subcellulaire : principalement cytoplasmique, mais transloque vers la membrane plasmique lors de la stimulation du TCR.
• Expression tissulaire : principalement dans les cellules T et les cellules natural killer, avec des niveaux plus faibles dans les thymocytes précoces et les cellules B pro/pré.
• Les caractéristiques clés incluent les domaines SH2 en tandem à l'extrémité N-terminale qui lient les ITAM phosphorylés, un domaine kinase avec un site de liaison à l'ATP, et plusieurs sites de phosphorylation (ex: Y319) qui régulent l'activité ; annotée avec des mots-clés tels que phosphoprotéine, épissage alternatif et variant de maladie.

Guidance Expérimentale et Conseils Techniques

• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique autour du Y319 de la ZAP70 humaine ; l'anticorps reconnaît également le phospho-Y352 correspondant de Syk en raison de la similitude de la séquence autour du site de phosphorylation.
• Pour le western blotting, envisagez d'utiliser des lysats de lignées de cellules T stimulées avec de l'anti-CD3 ou du pervanadate pour induire une phosphorylation robuste ; incluez un témoin de déphosphorylation (ex: traitement à la λ-phosphatase) pour confirmer la spécificité phospho.
• En immunofluorescence/ICC, optimisez les conditions de fixation et de perméabilisation pour préserver à la fois l'épitope phospho et l'architecture cellulaire ; contre-colorez avec un anticorps ZAP70 total pour évaluer l'état d'activation.
• Pour ELISA, un antigène de revêtement phosphopeptide peut être utilisé ; assurez-vous que les étapes de blocage minimisent la liaison non spécifique.
• La réactivité croisée avec la souris permet la détection dans les modèles de cellules T murines ; cependant, validez la réactivité dans le système expérimental spécifique.
• Le poids moléculaire prédit de ZAP70 est d'environ 70 kDa ; pour Syk, détectez l'isoforme d'environ 72 kDa. En WB, cela peut apparaître comme des bandes rapprochées ou une bande unique selon la résolution.

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