Anticorps polyclonal de lapin Anti-Phospho-ZAP70-Y319 pour WB, IP, ELISA - P43403

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de ZAP70

• ZAP-70 (protéine associée à la chaîne zéta de 70 kDa) est une tyrosine kinase cytoplasmique codée par le gène ZAP70 (SRK) et appartient à la famille Syk des tyrosine kinases non réceptorielles.
• Essentielle à l'immunité adaptative, ZAP-70 est recrutée sur le complexe phosphorylé du récepteur des lymphocytes T (TCR) au niveau de la membrane plasmique via ses domaines SH2, initiant la signalisation en aval. Références associées : PMID:7509083
• Lors de l'engagement du TCR, ZAP-70 phosphoryle les adaptateurs clés LAT et LCP2, déclenchant des cascades qui conduisent à l'activation, la prolifération des lymphocytes T et la production de cytokines.
• Régule le développement des thymocytes, favorisant la survie et la progression du cycle cellulaire des thymocytes double négatifs avant la sélection positive.
• Est également impliquée dans le développement et l'activation des lymphocytes B primaires via la signalisation du récepteur des lymphocytes B (BCR).
• Localisée dans le cytoplasme et au niveau de la membrane cellulaire, ZAP-70 subit une phosphorylation au niveau de Y319 (parmi d'autres résidus) pour lever l'auto-inhibition et permettre une activité kinase complète.
• La phosphorylation, l'acétylation et l'ubiquitination sont des modifications post-traductionnelles critiques qui régulent la stabilité et la fonction de ZAP-70.
• Exprimée majoritairement dans les lymphocytes T, les cellules natural killer, les thymocytes précoces et les cellules pro/pré-B.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Cet anticorps a été obtenu contre un phosphopeptide synthétique correspondant à Y319 de ZAP70 humain ; confirmez la spécificité par un test de compétition peptidique si nécessaire.
• Pour le Western blotting, utilisez des protocoles validés spécifiques aux protéines phosphorylées et ajoutez des inhibiteurs de phosphatase dans les tampons de lyse pour préserver l'état de phosphorylation.
• Dans les expériences d'immunoprécipitation, des conditions de lyse douces sont recommandées pour maintenir les interactions protéine-protéine et l'accessibilité de l'épitope.
• Validez les performances dans des lignées de lymphocytes T humaines appropriées (comme Jurkat) activées par anti-CD3/CD28 pour induire la phosphorylation de ZAP70.
• Pour les applications ELISA, titrez la concentration de l'anticorps par rapport à un standard de phosphopeptide pour garantir une gamme de détection linéaire.

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