Anticorps Polyclonal de Lapin Anti-Phospho-SMO (S611/S615) pour WB, ELISA - Q99835

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation du SMO

• Le SMO (smoothened) est un récepteur couplé aux protéines G et un transducteur pivot de la voie de signalisation Hedgehog, essentiel pour le développement embryonnaire et l'homéostasie des tissus adultes.
• En l'absence de ligands Hedgehog, le SMO est inhibé par le récepteur patched (PTCH1/PTCH2), qui restreint l'accès du cholestérol au SMO ; la liaison de Hedgehog à patched soulage cette inhibition, permettant la translocation du SMO vers le cil primaire et son activation par le cholestérol. Références connexes : PMID:27437577 PMID:28344083 PMID:32929279
• Lors de l'activation, le SMO se couple à la protéine G G(i), inhibant l'adénylate cyclase et réduisant les niveaux d'AMPc ; cela déréprime la protéine kinase A (PKA), conduisant à la stabilisation et à l'activation des facteurs de transcription GLI. Références connexes : PMID:28344083 PMID:31168089
• Le SMO actif peut également inhiber directement la PKA en séquestrant sa sous-unité catalytique PRKACA à la membrane cellulaire, empêchant la phosphorylation et le traitement des facteurs de transcription GLI. Références connexes : PMID:36202993 PMID:39138140
• Le SMO se localise principalement à la membrane cellulaire et à la membrane du cil primaire, un compartiment clé pour la signalisation Hedgehog.
• L'anticorps reconnaît spécifiquement la phosphorylation aux résidus sérine 611 et 615, des modifications post-traductionnelles qui influencent probablement la conformation, l'activité ou le trafic du SMO.
• Les mutations du SMO sont impliquées dans divers troubles du développement et cancers, soulignant son rôle régulateur critique.

Guides Expérimentaux et Conseils Techniques

• L'immunogène est un peptide phosphorylé synthétique autour de Ser611/Ser615 du SMO humain ; pour le Western blot, une bande proche de 86 kDa est attendue. Pour confirmer la spécificité phospho, envisagez de traiter les échantillons avec la phosphatase lambda ou d'utiliser un compétiteur de non-phosphopeptide.
• Comme les états de phosphorylation du SMO peuvent être dynamiques, l'utilisation de cocktails d'inhibiteurs de phosphatases pendant la lyse est conseillée ; incluez également des témoins positifs et négatifs appropriés (par exemple, cellules stimulées par Hedgehog vs non stimulées).
• La détection par Western blot peut nécessiter une optimisation du blocage et de la dilution de l'anticorps ; testez une gamme de concentrations et validez sur des lignées cellulaires humaines ou des tissus avec une signalisation Hedgehog active (par exemple, fibroblastes traités au SHH).
• Pour l'ELISA, l'anticorps peut convenir pour détecter des peptides SMO phosphorylés ou des lysats cellulaires ; confirmez la liaison avec un peptide phospho-spécifique et un témoin non-phospho pour évaluer la spécificité.

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