Anticorps polyclonal Anti-Phospho-Smad5 (S463/S465) pour WB, IHC-P, ELISA - Q99717

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Smad5

• SMAD5 est un membre de la famille SMAD de transducteurs de signaux intracellulaires et de modulateurs transcriptionnels, également connu sous les noms JV5-1, Mothers against decapentaplegic homolog 5 ou MADH5.
• Après liaison du ligand BMP, SMAD5 est phosphorylé sur les sérines C-terminales conservées (dont S463 et S465) par les récepteurs BMP de type I activés, puis s'associe à SMAD4 pour former un complexe hétéromérique qui se transloque dans le noyau afin de réguler l'expression des gènes cibles. Références associées : PMID:9442019, PMID:33510867
• En tant que facteur de transcription, SMAD5 phosphorylé reconnaît les éléments de liaison à Smad (SBE) dans les promoteurs géniques pour moduler divers processus cellulaires tels que le développement embryonnaire, la différenciation cellulaire, l'angiogenèse et l'homéostasie tissulaire. Références associées : PMID:12064918, PMID:16516194
• Dans son état non phosphorylé, SMAD5 agit dans le cytoplasme pour influencer le métabolisme énergétique en interagissant avec l'hexokinase 1 (HK1) pour accélérer la glycolyse et en favorisant la respiration mitochondriale en réponse aux changements de pH cytoplasmique. Références associées : PMID:28675158
• SMAD5 se localise principalement dans le cytoplasme et le noyau, mais également dans la mitochondrie, ce qui reflète ses rôles multifonctionnels.
• La protéine est exprimée de manière ubiquitaire dans tous les tissus et est soumise à des modifications post-traductionnelles incluant la phosphorylation et l'acétylation ; elle se lie à l'ADN et aux ions zinc.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène est un peptide phosphorylé synthétique autour de S463 et S465, ce qui confère à l'anticorps une reconnaissance spécifique de Smad5 phosphorylé sur ces sites cibles des récepteurs BMP. Il est recommandé d'utiliser des inhibiteurs de phosphatases pendant la préparation des échantillons pour préserver la phosphorylation.
• Pour le Western blot (WB), le poids moléculaire prédit est de 52 kDa ; validez la détection dans des lysats cellulaires stimulés par BMP pertinents (par exemple, échantillons humains, de souris ou de rat).
• Pour l'immunohistochimie (IHC-P), optimisez la récupération d'antigène et validez sur des coupes de tissus où la signalisation BMP est active ; utilisez des contrôles isotypiques pour confirmer la spécificité.
• Cet anticorps peut présenter une réactivité croisée avec Smad5 non phosphorylé ou d'autres membres de la famille Smad ; vérifiez la spécificité en comparant les signaux dans des échantillons stimulés et non stimulés ou en utilisant des inhibiteurs spécifiques.
• En ELISA, confirmez la phospho-spécificité par compétition avec un peptide phosphorylé et calibrez avec des étalons connus.

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