Anticorps monoclonal de lapin anti-Phospho-RB1 (S780) pour WB, ELISA - P06400

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de RB1

• La protéine associée au rétinoblastome (RB1) est un suppresseur de tumeur clé et un régulateur du cycle cellulaire, contrôlant la transition G1/S et la progression G0-G1. Son activité est régie par son état de phosphorylation.
  Références associées : PMID:10499802 PMID:15084261
• La RB1 hypophosphorylée se lie aux facteurs de transcription E2F et les inhibe, bloquant ainsi la transcription des gènes nécessaires à l'entrée en phase S. Elle masque physiquement le domaine de transactivation d'E2F et recrute des répresseurs modifiant la chromatine.
  Références associées : PMID:10499802
• RB1 contribue directement à la formation et au maintien de l'hétérochromatine en stabilisant la méthylation des histones, notamment en recrutant SUV39H1 et KMT5B/C pour méthyler H4K20 et renforcer l'hétérochromatine constitutive.
• La protéine médie également la répression transcriptionnelle via SMARCA4/BRG1 en ancrant des complexes histone désacétylase (HDAC) à des promoteurs comme celui de c-FOS. Dans les neurones, cette répression est levée par la déphosphorylation de RB1 dépendante du calcium.
• Les oncoprotéines virales (antigène T large du SV40, E7 du HPV, E1A de l'adénovirus) ciblent RB1, dissociant le complexe RB1-E2F pour forcer la cellule hôte à entrer en phase S.
• Au niveau subcellulaire, RB1 est principalement nucléaire, où elle exerce ses fonctions de régulation transcriptionnelle, mais elle peut également se localiser dans le cytoplasme.
• Exprimée dans la rétine et les kératinocytes du prépuce, avec une expression supplémentaire dans de nombreux types de tissus.
  Références associées : PMID:20940255
• Les modifications post-traductionnelles incluent une phosphorylation extensive (par exemple, sur S780 par les kinases cycline-dépendantes), une acétylation et une méthylation, qui modulent collectivement son activité, ses interactions protéiques et sa stabilité. Les mots-clés incluent régulateur de la chromatine, suppresseur de tumeur et interaction hôte-virus.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Cet anticorps monoclonal de lapin phospho-spécifique cible le site de phosphorylation S780 sur RB1 ; assurez-vous du statut de phosphorylation de l'échantillon en traitant les cellules avec des stimuli appropriés (par exemple, stimulation sérique, inhibiteurs de CDK4/6) et incluez toujours des inhibiteurs de phosphatases pendant la lyse pour préserver l'épitope.
• Pour le Western blot, la bande attendue est d'environ 106 kDa. Validez la spécificité en utilisant un contrôle de blocage par peptide non phospho, et comparez les signaux dans des lysats traités ou non à la phosphatase.
• En ELISA, envisagez d'utiliser des peptides synthétiques phospho et non phospho comme antigènes de revêtement pour confirmer la sélectivité en fonction de l'état de phosphorylation.
• La réactivité croisée est rapportée pour l'humain et le rat ; si vous utilisez des échantillons de souris, vérifiez l'homologie de séquence autour de S780 et effectuez une expérience pilote.
• Optimisez la dilution de l'anticorps de manière empirique, car aucune concentration de travail validée n'est fournie, et incluez toujours des contrôles positifs (par exemple, lignées cellulaires cancéreuses proliférantes) et négatifs (par exemple, lignées nulles pour RB1 ou privées de sérum).

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