Anticorps monoclonal lapin Anti-Phospho-Raf1-S621 pour WB, ELISA - P04049

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de RAF1 (c-Raf)

• RAF1 (également appelée c-Raf ou Raf-1) est une sérine/thréonine-protéine kinase qui agit comme un lien régulateur essentiel entre les GTPases Ras associées à la membrane et la cascade MAPK/ERK, fonctionnant comme un interrupteur contrôlant les décisions de destin cellulaire, notamment la prolifération, la différenciation, l'apoptose et la survie.
• La kinase initie une cascade de protéine kinase activée par les mitogènes (MAPK) en phosphorylant séquentiellement les MAP kinases à double spécificité (MAP2K1/MEK1 et MAP2K2/MEK2) et les kinases régulées par les signaux extracellulaires (MAPK3/ERK1 et MAPK1/ERK2).
• RAF1 phosphoryle divers substrats : BAD (au niveau de Ser-75, via PAK1), les adénylyl cyclases (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A (inhibant l'activité phosphatase), et TNNT2 ; elle favorise également l'activation de NF-κB et inhibe les kinases ROCK2, ASK1 et MST2.
• La protéine protège les cellules de l'apoptose en se translocalisant vers les mitochondries, où elle se lie à BCL2 et déplace BAD ; elle limite également l'activation des caspases en réponse à la stimulation par Fas, à l'apoptose des macrophages médiée par des pathogènes et à la différenciation érythroïde.
• RAF1 contribue à la transformation oncogénique par la répression de l'occludine (OCLN), une protéine des jonctions serrées, en induisant la régulation à la hausse du répresseur transcriptionnel SNAI2/SLUG.
• La localisation sous-cellulaire inclut le cytoplasme, la membrane cellulaire, la mitochondrie et le noyau, ce qui reflète ses rôles régulateurs multiples.
• La protéine possède un domaine à doigt de zinc, se lie à l'ATP et est soumise à la phosphorylation (par exemple S621), à la méthylation et à l'épissage alternatif (l'isoforme 1 est plus abondante dans le muscle squelettique).
• Les mots-clés associés à RAF1 incluent cardiomyopathie, surdité, variant pathologique, proto-oncogène et sérine/thréonine-protéine kinase, ce qui indique son implication aussi bien dans la physiologie normale que dans la pathologie.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène est un peptide phosphorylé synthétique ; assurez-vous que les échantillons sont traités avec des inhibiteurs de phosphatase pour préserver l'état de phosphorylation pendant la lyse et la préparation.
• Pour le Western blotting, attendez une bande à environ 73 kDa ; incluez des contrôles appropriés tels que des lysats traités à la phosphatase ou des cellules stimulées versus non stimulées pour confirmer la spécificité vis-à-vis de la forme phosphorylée.
• La phosphorylation de RAF1 étant dynamique, pensez à utiliser en parallèle un anticorps anti-RAF1 total pour normaliser les signaux et interpréter correctement les changements d'activation.
• En ELISA, optimisez la concentration d'antigène de revêtement et la dilution de l'anticorps ; une courbe étalon avec un phospho-peptide connu peut faciliter la quantification.
• La réactivité croisée avec les tissus de rat est rapportée ; validez les performances de l'anticorps dans votre système de modèle de rat spécifique, car l'intensité du signal peut varier selon les échantillons.

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