Anticorps Polyclonal de Lapin Anti-Phospho-Raf1 (S259) pour WB, IP, ELISA - P04049

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de RAF1

• RAF1 (également connu sous le nom de c-Raf ou Raf-1) est une sérine/thréonine kinase qui agit comme un lien régulateur critique entre les GTPases Ras associées à la membrane et la cascade de signalisation MAPK/ERK, régissant le destin cellulaire tel que la prolifération, la différenciation, l'apoptose, la survie et la transformation oncogénique.
• Lors de son activation, RAF1 initie une cascade de protéines kinases activées par des mitogènes (MAPK) par phosphorylation séquentielle des MAPK kinases à double spécificité (MAP2K1/MEK1 et MAP2K2/MEK2) et des kinases régulées par des signaux extracellulaires (MAPK3/ERK1 et MAPK1/ERK2).
• RAF1 phosphorylate de multiples cibles en aval, y compris BAD (au Ser-75), les adénylates cyclases (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A (inhibant l'activité phosphatase) et TNNT2 (troponine T cardiaque), modulant ainsi l'apoptose, la signalisation de l'AMPc et la fonction cardiaque.
• La protéine peut promouvoir l'activation de NF-kB et inhiber les transducteurs de signaux impliqués dans la motilité (ROCK2), l'apoptose (MAP3K5/ASK1 et STK3/MST2), la prolifération et l'angiogenèse (RB1), soulignant ses vastes rôles régulateurs.
• RAF1 a été impliqué dans la transformation oncogénique des cellules épithéliales en régulant à la hausse le répresseur transcriptionnel SNAI2/SLUG, qui régule à la baisse la protéine des jonctions serrées l'occludine (OCLN), et il restreint l'activation des caspases en réponse à la stimulation Fas, à l'apoptose des macrophages médiée par des pathogènes et à la différenciation érythroïde.
• À l'échelle sous-cellulaire, RAF1 se trouve dans le cytoplasme, la membrane cellulaire, la mitochondrie et le noyau, la translocation vers les mitochondries permettant la liaison à BCL2 et le déplacement de BAD pour protéger les cellules de l'apoptose.
• La protéine contient un domaine à doigt de zinc, est sujette à phosphorylation (y compris au niveau de la Ser259, que cet anticorps reconnaît) et joue des rôles dans la cicatrisation, la signalisation Rho et la migration.
• Dans le muscle squelettique, l'isoforme 1 est plus abondante que l'isoforme 2 ; RAF1 est associée à des maladies telles que la cardiomyopathie et la surdité (CMD1NN).

Conseils Expérimentaux et Techniques

• L'immunogène est un peptide phosphorylé synthétique couvrant la Ser259 de la RAF1 humaine. Cette conception cible théoriquement l'épitope phosphorylé ; cependant, les utilisateurs doivent valider la spécificité de phosphorylation en comparant les signaux entre des lysats traités à la phosphatase et non traités dans leur système expérimental.
• Puisque l'anticorps est élevé chez le lapin contre un peptide humain, la réactivité croisée avec d'autres espèces n'est pas garantie ; validez dans le système d'échantillon pertinent si des modèles non humains sont utilisés.
• Pour le Western blot (WB), une bande autour de 73 kDa est attendue. Utilisez des conditions de blocage et de lavage appropriées pour minimiser la liaison non spécifique, et incluez un témoin positif (par exemple, des lysats cellulaires stimulés) pour confirmer la détection spécifique de la phosphorylation.
• Dans l'immunoprécipitation (IP) et l'ELISA, l'anticorps peut fonctionner comme indiqué ; envisagez d'optimiser les concentrations d'anticorps et les conditions de tampon pour votre dosage spécifique.
• Évitez les cycles répétés de congélation-décongélation ; aliquotez et stockez à -20°C ou selon les recommandations.

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