Anticorps monoclonal de lapin anti-Phospho-Raf1-S259 pour WB et ELISA - P04049

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de RAF1

• RAF1 (également connue sous le nom de c-RAF ou Raf-1) est une sérine/thréonine-protéine kinase qui sert de lien régulateur critique entre les GTPases Ras liées à la membrane et la cascade de signalisation MAPK/ERK en aval, contrôlant les décisions du destin cellulaire telles que la prolifération, la différenciation, l'apoptose et la survie.
• Lors de son activation, RAF1 phosphoryle et active les kinases à double spécificité MEK1/2, qui à leur tour phosphorylent ERK1/2, propageant ainsi les signaux qui régulent l'expression des gènes et les réponses cellulaires.
• La RAF1 phosphorylée (par exemple, sur Ser-338 et Ser-339) phosphoryle directement la protéine pro-apoptotique BAD, favorisant la survie cellulaire. Elle phosphoryle également les adénylyl cyclases (ADCY2/5/6) et module la phosphatase PPP1R12A.
• RAF1 influence de multiples voies de signalisation : elle peut favoriser l'activation de NF-κB tout en inhibant des effecteurs comme ROCK2 (motilité), ASK1/MST2 (apoptose) et RB1 (prolifération/angiogenèse).
• Sous l'effet de stimuli apoptotiques, RAF1 peut se transloquer vers les mitochondries, où elle se lie à BCL2 et déplace BAD, fournissant un mécanisme anti-apoptotique supplémentaire.
• RAF1 joue un rôle dans la migration cellulaire en régulant la signalisation Rho et est nécessaire à une cicatrisation normale des plaies. Elle contribue également à la transformation oncogénique par répression transcriptionnelle des protéines des jonctions serrées comme l'occludine (OCLN).
• La protéine est principalement localisée dans le cytoplasme et au niveau de la membrane cellulaire, mais peut également se trouver dans les mitochondries et le noyau dans certaines conditions.
• RAF1 est exprimée dans divers tissus ; dans le muscle squelettique, l'isoforme 1 est plus abondante que l'isoforme 2.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un peptide phosphorylé synthétique centré sur Ser259 de la RAF1 humaine (P04049). L'anticorps obtenu est censé reconnaître spécifiquement RAF1 lorsqu'elle est phosphorylée sur Ser259 ; confirmez la spécificité en comparant les signaux entre des échantillons traités à la phosphatase et non traités.
• Pour le Western blot (WB), utilisez un extrait protéique de cellules humaines ou de rat connues pour exprimer RAF1. Une bande d'environ 73 kDa doit être observée dans des conditions réductrices. Incluez toujours des témoins positifs et négatifs appropriés (par exemple, lysats privés de sérum vs stimulés par un facteur de croissance).
• Pour l'ELISA, titrez l'anticorps contre l'immunogène peptidique phosphorylé et validez-le dans une matrice biologique pertinente pour assurer une détection linéaire. Envisagez de l'associer à un anticorps anti-RAF1 total pour normaliser les niveaux de phosphorylation.
• Étant donné que l'anticorps est fourni sur des sacs de glace, évitez les cycles répétés de congélation-décongélation et stockez-le dans les conditions recommandées pour préserver son activité.

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