Ac pAb de Lapin Anti-Phospho-POLR2A CTD-S7 pour WB, IHC-P, ELISA, ChIP - P24928

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de POLR2A

• POLR2A, également connu sous le nom de RPB1 ou POLR2, est la plus grande sous-unité de l'ARN polymérase II (Pol II), une ARN polymérase dépendante de l'ADN responsable de la synthèse des précurseurs d'ARNm et de nombreux ARN non codants fonctionnels.
• Il forme le cœur catalytique avec la deuxième plus grande sous-unité POLR2B, utilisant un motif DxDGD de coordination du Mg²⁺ pour la polymérisation des nucléotides et une activité exonucléase 3'→5' pour la relecture. Références associées : PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
Références associées : PMID:24207025, PMID:26124092
• L'acétylation des lysines du CTD active les gènes immédiats précoces induits par les facteurs de croissance, tandis que la méthylation et la diméthylation répriment l'expression des gènes cibles, affinant ainsi la sortie transcriptionnelle. Références associées : PMID:24207025, PMID:26124092
• POLR2A se localise principalement dans le noyau mais est également détectée dans le cytoplasme et sur les chromosomes, ce qui est cohérent avec son rôle dynamique dans la transcription.
• Il agit comme une ARN polymérase dépendante de l'ARN qui étend les ARN non codants et peut fonctionner comme une réplicase pour le virus de l'hépatite delta.
• Les mots-clés associés à POLR2A incluent phosphoprotéine, acétylation, méthylation, liaison à l'ADN, liaison aux métaux, transcription, interaction hôte-virus et variant pathologique, reflétant sa régulation complexe.
• Les mutations de POLR2A sont liées à des troubles du neurodéveloppement tels que le déficit intellectuel (NEDHIB).

Conseils Expérimentaux et Techniques

• Pour le western blot, utilisez un gel SDS-PAGE à faible pourcentage (par exemple 6 % ou en gradient) et un transfert humide pour assurer un transfert efficace de la protéine de 217 kDa.
• Incluez des cocktails d'inhibiteurs de phosphatases dans les tampons de lyse pour préserver le signal de phosphorylation S7 ; envisagez d'utiliser un peptide non phosphorylé ou un échantillon traité à la phosphatase comme témoin négatif.
• En IHC-P, optimisez les conditions de retrieval de l'antigène (tampons à base de citrate ou d'EDTA) et utilisez un système de détection par polymère pour amplifier le signal.
• Pour ELISA, employez le peptide phospho comme témoin positif et le peptide non phospho correspondant pour confirmer la spécificité.
• En ChIP, réticulez les protéines à l'ADN et cisaillez la chromatine en fragments de 200 à 500 pb ; l'anticorps peut enrichir la Pol II au niveau des promoteurs des gènes activement transcrits.
• Validez les performances de l'anticorps dans l'espèce et le contexte tissulaire pertinents avant de procéder à des expériences à grande échelle.

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