Anticorps Polyclonal de Lapin Anti-Phospho-POLR2A CTD-S5 pour WB, IHC-P, ELISA - P24928

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de POLR2A (RPB1)

• En tant que plus grande sous-unité de l'ARN polymérase II, POLR2A/RPB1 forme le cœur catalytique responsable de la synthèse d'ARN dépendante de l'ADN, transcrivant les précurseurs d'ARNm et les ARN non codants (PubMed:23748380, PubMed:27193682, PubMed:30190596). Références connexes : PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596

• Conjointement avec la sous-unité POLR2B/RPB2, elle forme le centre actif présentant un motif DxDGD de coordination du Mg2+ et fournit une activité de preuve de lecture exonucléase 3'→5' pour assurer la fidélité de la transcription (PubMed:30190596, PubMed:8381534, PubMed:9852112). Références connexes : PMID:30190596 PMID:8381534 PMID:9852112

• Le domaine C-terminal (CTD) est constitué de 52 répétitions en tandem d'heptapeptides (YSPTSPS) et subit une phosphorylation dynamique : la phosphorylation de la Ser5 (cible de cet anticorps) favorise l'évasion du promoteur, tandis que la phosphorylation de la Ser2 facilite l'élongation et le traitement de l'ARNm (PubMed:24207025, PubMed:26124092). Références connexes : PMID:24207025 PMID:26124092

• Au-delà de son rôle dépendant de l'ADN, POLR2A présente une activité d'ARN polymérase dépendante de l'ARN, contribuant au métabolisme des ARN non codants et agissant comme réplicase pour le virus de l'hépatite delta.

• Principalement localisée dans le noyau, POLR2A transite également vers le cytoplasme et s'associe aux chromosomes mitotiques, reflétant ses rôles régulateurs multifacettes.

• Les mutations de POLR2A sont liées à un trouble du neurodéveloppement caractérisé par une hypotonie, une déficience intellectuelle et des traits faciaux caractéristiques (NEDHIB), soulignant son rôle essentiel dans le développement humain.

• Les modifications post-traductionnelles du CTD, y compris l'acétylation et la méthylation des résidus de lysine, fournissent une couche réglementaire supplémentaire pour l'expression des gènes, l'acétylation étant cruciale pour l'activation des gènes à réponse immédiate.

Conseils Expérimentaux et Astuces Techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique conçu pour reconnaître spécifiquement le résidu phosphorylé Ser5 dans le contexte de la répétition du CTD ; la réactivité croisée avec le peptide non phosphorylé ou d'autres épitopes phospho (par exemple, Ser2, Ser7) doit être évaluée dans le système d'échantillonnage pertinent.
• Pour l'analyse par Western blot (WB), une bande majeure à environ 217 kDa correspondant à la POLR2A pleine longueur est attendue ; incluez des inhibiteurs de phosphatases dans les tampons de lyse et d'électrophorèse pour préserver l'épitope phospho.
• En immunohistochimie (IHC-P), les méthodes de récupération d'antigène peuvent affecter la stabilité de l'épitope phospho ; testez des protocoles doux à base de citrate ou d'EDTA et validez avec des témoins phosphorylés positifs et négatifs appropriés.
• Les applications ELISA peuvent nécessiter un revêtement avec le peptide phosphorylé et un blocage dans des conditions qui maintiennent la spécificité de l'anticorps pour l'antigène phospho.
• La réactivité croisée est rapportée pour les échantillons humains, de souris et de rat ; cependant, puisque la séquence de répétition du CTD est hautement conservée, vérifiez la spécificité dans votre organisme modèle spécifique par alignement de séquence si nécessaire.

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