Anticorps monoclonal de lapin anti-phospho-PKC alpha-T638 pour WB, ELISA - P17252

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la PKC alpha

• La protéine kinase C de type alpha (PKCα) est une sérine/thréonine-protéine kinase activée par le calcium et dépendante des phospholipides et du diacylglycérol (DAG), qui régule divers processus cellulaires, notamment la prolifération, l'apoptose, la différenciation, la migration, l'adhésion et l'angiogenèse.
• La PKCα intervient dans la régulation positive et négative de la progression du cycle cellulaire ; elle peut favoriser la croissance via la signalisation RAF1/MAPK/ERK ou induire un arrêt du cycle cellulaire par l'hyperphosphorylation de RB1 et l'induction d'inhibiteurs de CDK (CDKN1A, CDKN1B).
• La kinase présente des fonctions anti-apoptotiques dans les cellules cancéreuses en supprimant l'activation d'IGFBP3 médiée par p53/TP53 et en phosphorylant BCL2, contribuant ainsi à la promotion tumorale dans les gliomes et les cancers du sein.
• La PKCα joue un rôle crucial dans la biologie cardiovasculaire : elle régule négativement la contractilité myocardique, entraîne l'hypertrophie des cardiomyocytes via la signalisation ERK1/2 et favorise l'angiogenèse en améliorant la migration des cellules endothéliales et la prolifération induite par VEGFA.
• Dans la fonction plaquettaire, la PKCα médie la libération de granules dépendante de CD36/GP4 et l'activation de l'intégrine ITGA2B-ITGB3 via la voie RAP1GAP, contribuant à la formation de thrombus.
• La kinase est impliquée dans les réponses immunitaires, notamment la différenciation des macrophages et la migration des lymphocytes T induite par les chimiokines ; elle phosphoryle DOCK8 pour réguler l'activation de CDC42. Références associées : PMID:28028151
• La localisation subcellulaire de la PKCα est dynamique : on la trouve dans le cytoplasme, la membrane cellulaire, la membrane mitochondriale et le noyau, selon l'état d'activation et les stimuli.
• La PKCα phosphoryle un large éventail de substrats, notamment TNNT2/CTNT (régulant la contractilité cardiaque), KLHL3 (modulant la stabilité de WNK4 en réponse à l'angiotensine II) et LRRK1 (impliqué dans le trafic intracellulaire). Références associées : PMID:25313067 PMID:36040231

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique couvrant le site Thr638 de la PKCα humaine ; la spécificité de l'anticorps pour la forme phosphorylée doit être validée en comparant les signaux dans des échantillons traités à la phosphatase par rapport à des échantillons non traités.
• Pour le Western blot, envisagez d'utiliser des gels SDS-PAGE à faible pourcentage pour résoudre la protéine de 77 kDa, et incluez des contrôles de charge appropriés ainsi que des anticorps anti-PKCα non spécifiques à la phosphorylation pour évaluer les niveaux de protéine totale.
• Dans les applications ELISA, étudiez empiriquement les concentrations d'antigène de revêtement et les conditions de blocage ; un test de compétition par phosphopeptide peut aider à confirmer la liaison phospho-spécifique.
• Comme l'activation de la PKCα est transitoire et dépendante des stimuli, optimisez les protocoles de stimulation cellulaire (par exemple, PMA, facteurs de croissance) et assurez une préparation rapide des échantillons avec des inhibiteurs de phosphatase.

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