Anticorps polyclonal de lapin anti-Phospho-NFKB1-S893 pour IF/ICC - P19838

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de NFKB1

• NF-κB est un facteur de transcription pléiotropique qui régule un large éventail de processus biologiques, notamment l'inflammation, l'immunité, la différenciation, la croissance cellulaire, la tumorigenèse et l'apoptose, et il est exprimé dans presque tous les types cellulaires.
• Le gène NFKB1 code pour la protéine précurseur p105, qui exerce deux fonctions : il agit comme facteur de rétention cytoplasmique pour les complexes NF-κB, et il subit un traitement co-traductionnel pour générer la sous-unité active p50.
  Références associées : PMID:1423592
• La sous-unité active p50 forme principalement des hétérodimères avec RELA/p65 pour former le complexe NF-κB transcriptionnellement compétent, qui se lie à la séquence consensus κB d'ADN 5'-GGRNNYYCC-3' dans les régions amplificatrices des gènes impliqués dans les réponses immunitaires et de phase aiguë.
  Références associées : PMID:1740106, PMID:7830764
• Selon la composition des dimères, les complexes NF-κB peuvent agir comme activateurs transcriptionnels (par exemple p65-p50) ou répresseurs (par exemple homodimères p50-p50), permettant un contrôle précis de l'expression génique.
• Dans les cellules non stimulées, NF-κB est séquestré dans le cytoplasme par les protéines inhibitrices IκB ; après activation par divers stimuli, IκB est phosphorylé et dégradé, ce qui permet la translocation de NF-κB vers le noyau.
• La protéine NFKB1 est soumise à de nombreuses modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation, l'acétylation, l'hydroxylation, la S-nitrosylation et l'ubiquitination, qui régulent son activité, sa stabilité et ses interactions protéiques.
• La phosphorylation sur la sérine 893 (S893) se produit dans le domaine C-terminal de type IκB de p105, une région qui est généralement éliminée lors du traitement protéasomique conduisant à p50, ce qui suggère un rôle régulateur dans la dynamique de rétention cytoplasmique ou de traitement de p105.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique correspondant aux résidus autour du S893 de NFKB1 humain, ce qui indique que l'anticorps reconnaît spécifiquement la forme phosphorylée de NFKB1 sur ce site.
• Pour l'immunocytochimie/immunofluorescence (ICC/IF), nous recommandons d'utiliser des protocoles de fixation et de perméabilisation appropriés qui préservent l'état de phosphorylation. La fixation au méthanol ou au paraformaldéhyde peut convenir ; cependant, testez avec et sans inhibiteurs de phosphatases.
• Vérifiez la spécificité de l'anticorps en pré-incubant ce dernier avec l'immunogène phosphopéptidique ou en traitant les cellules avec une phosphatase avant le marquage.
• À noter que le site de phosphorylation S893 se trouve dans le domaine C-terminal de type IκB de p105. Ce domaine est dégradé lors du traitement protéasomique qui génère la sous-unité mature p50. Par conséquent, l'anticorps est censé détecter la p105 phosphorylée (~105 kDa) et non le produit clivé p50.
• Comme la réactivité croisée n'a été démontrée que pour l'homme, validez l'anticorps sur les lignées cellulaires ou tissus humains concernés. Les niveaux d'expression peuvent varier selon les types cellulaires et les conditions de stimulation.

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