Anticorps polyclonal de lapin anti-Phospho-NF-kB p65/RelA-T435 pour WB et ELISA - Q04206

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de NF-kB p65/RelA

• Codé par le gène RELA, NF-kB p65 (également appelé RelA) est une sous-unité du complexe facteur de transcription NF-kB, qui joue un rôle central dans la régulation des réponses immunitaires, de l'inflammation, de la prolifération cellulaire et de l'apoptose.
• NF-kB fonctionne sous forme d'homodimère ou d'hétérodimère ; l'hétérodimère RELA-NFKB1 est la forme la plus abondante, et l'homodimère RELA-RELA peut également activer la transcription au niveau des promoteurs de gènes cibles spécifiques.
• Dans les cellules non stimulées, les dimères de NF-kB sont séquestrés dans le cytoplasme par les protéines inhibitrices de kB (IkB) ; après stimulation, IkB est phosphorylé par IKK et dégradé, permettant à NF-kB de se translocaliser dans le noyau et d'activer l'expression génique.
• RELA est essentiel pour l'expression des gènes de cytokines dans les lymphocytes T, contribuant aux réponses immunitaires adaptatives. Références associées : PMID:15790681
• Il a été identifié comme un facteur de transcription clé régulant la réponse interféron lors de l'infection par le SARS-CoV-2. Références associées : PMID:33440148
• RELA est soumis à de nombreuses modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation (par exemple au niveau du Thr435), l'acétylation, la méthylation et autres, qui modulent son activité transcriptionnelle et ses interactions.
• La protéine se localise principalement dans le cytoplasme à l'état inactif, et dans le noyau après activation, où elle se lie à l'ADN et recrute des coactivateurs.
• Les épissages alternatifs et les réarrangements chromosomiques impliquant RELA ont été associés à certaines maladies, soulignant son importance aussi bien en physiologie normale qu'en pathologie.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène utilisé pour générer cet anticorps est un peptide phosphorylé synthétique autour du Thr435, il reconnaît donc spécifiquement la forme phosphorylée de p65. Pour le WB, assurez-vous que les lysats cellulaires sont préparés avec des inhibiteurs de phosphatases pour préserver l'état de phosphorylation.
• Lors de la réalisation d'un ELISA, envisagez d'utiliser à la fois des peptides phosphorylés et non phosphorylés pour vérifier la phospho-spécificité de l'anticorps.
• Pour le western blotting, une bande d'environ 60 kDa est attendue ; validez en utilisant des contrôles positifs connus pour avoir activé NF-kB (par exemple des cellules traitées au TNF-alpha) et des contrôles négatifs (par exemple des lysats non traités ou traités à la phosphatase).
• L'anticorps est décrit comme réagissant avec des échantillons humains et murins ; la réactivité croisée avec d'autres espèces doit être évaluée expérimentalement si nécessaire.
• Optimisez les dilutions de l'anticorps primaire en fonction de votre système d'échantillon ; les points de départ typiques sont 1:500-1:2000 pour le WB, mais les conditions exactes peuvent varier.

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