Anticorps monoclonal de lapin anti-Phospho-NF-kB p65/RelA (Ser468) pour WB, IP, ELISA - Q04206

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de NF-kB p65/RelA

• Le facteur de transcription p65 (RelA) est la sous-unité p65 du complexe du facteur de transcription NF-kB, un facteur pléiotropique présent dans presque tous les types cellulaires. Il constitue l'étape finale des voies de transduction du signal déclenchées par divers stimuli liés à l'inflammation, l'immunité, la différenciation, la croissance cellulaire, la tumorigenèse et l'apoptose.
• NF-kB fonctionne sous forme d'homodimère ou d'hétérodimère de protéines contenant un domaine Rel. La forme la plus abondante est l'hétérodimère RELA-NFKB1 (p65-p50). Ces dimères se lient aux sites kappa-B de l'ADN avec des affinités distinctes, les complexes RELA-NFKB1 et RELA-REL agissant comme activateurs transcriptionnels.
• L'activité de NF-kB est régulée par de multiples mécanismes, notamment les modifications post-traductionnelles, le compartimentage subcellulaire et les interactions avec des cofacteurs ou des corépresseurs. NF-kB inactif est retenu dans le cytoplasme par les protéines inhibitrices I-kB ; après phosphorylation et dégradation d'I-kB médiées par IKK, le complexe NF-kB est libéré et se transloque vers le noyau.
• RELA possède une affinité intrinsèque faible pour l'ADN mais contribue à la capacité de liaison à l'ADN du complexe NF-kB. Il module également l'accessibilité de la chromatine au niveau des promoteurs cibles, influençant indirectement l'expression génique.
• RELA est essentiel pour l'expression des gènes de cytokines dans les lymphocytes T, jouant un rôle central dans les réponses immunitaires adaptatives. Références associées : PMID:15790681
• Pendant l'infection par le SARS-CoV-2, RELA agit comme un facteur de transcription clé régulant la réponse interféron, soulignant son rôle dans l'immunité innée antivirale. Références associées : PMID:33440148
• Au niveau subcellulaire, RELA navigue entre le cytoplasme et le noyau. Il fait l'objet de nombreuses modifications post-traductionnelles, notamment l'acétylation, la méthylation, la phosphorylation (par exemple, au niveau de Ser468 ciblé par cet anticorps), la S-nitrosylation et la conjugaison à des protéines ubiquitine-like, qui modulent son activité, sa stabilité et ses interactions.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Pour le Western blot (WB), préparez les lysats avec un tampon RIPA complété par des inhibiteurs de protéases et de phosphatases pour préserver le signal de phosphorylation au niveau de Ser468. Réalisez la SDS-PAGE et le transfert, puis sondez avec l'anticorps à une dilution déterminée expérimentalement.
• Dans les expériences d'immunoprécipitation (IP), vérifiez que le niveau d'expression de la protéine cible est suffisant dans votre lysat cellulaire ou tissulaire. L'origine lapin et la nature monoclonal de l'anticorps peuvent faciliter une capture claire avec des réactifs secondaires adaptés à l'espèce.
• Pour la détection par ELISA, envisagez d'utiliser l'anticorps comme réactif de capture ou de détection, en validant la linéarité et la spécificité dans votre système d'essai avec des contrôles phospho-spécifiques appropriés.
• L'anticorps présentant une réactivité croisée avec l'homme, la souris et le rat, il peut être utilisé pour des études comparatives entre ces espèces. Cependant, vérifiez toujours les performances en incluant des contrôles positifs et négatifs pour chaque espèce et chaque condition de traitement.
• Optimisez la concentration de l'anticorps pour chaque application et type d'échantillon, car les dilutions recommandées peuvent varier selon les conditions expérimentales et les méthodes de détection.

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