Anticorps polyclonal de lapin anti-Phospho-NF-κB p65/RelA-S536 pour WB, IF/ICC, ELISA - Q04206

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du facteur de transcription p65

• La sous-unité p65 de NF-kappa-B (RELA) est un facteur de transcription central de la famille NF-kappa-B. Elle code pour une protéine de 60 kDa (aussi appelée p65, NFKB3, CMCU, AIF3BL3) qui joue un rôle essentiel dans les réponses immunitaires et au stress. Entrée UniProt : Q04206.
• Le complexe NF-kappa-B existe sous forme d'homo- ou d'hétérodimères ; l'hétérodimère RELA-NFKB1 (p50) est le plus abondant et agit comme activateur transcriptionnel en se liant à des motifs spécifiques d'ADN κB dans les promoteurs de gènes.
• L'activation de NF-kappa-B implique la phosphorylation induite par un stimulus et la dégradation des inhibiteurs IκB, ce qui libère le complexe RELA pour qu'il se transloque du cytoplasme vers le noyau. La phosphorylation de RELA sur Ser536, située dans le domaine de transactivation, améliore son activité transcriptionnelle et constitue une marque de l'activation canonique de NF-κB.
• La localisation subcellulaire de RELA est strictement contrôlée : dans les cellules au repos, elle est majoritairement cytoplasmique liée à IκB ; après induction, elle s'accumule dans le noyau pour moduler l'expression des gènes cibles. L'immunofluorescence permet de détecter la translocation nucléaire comme indicateur de l'activation de la voie.
• RELA est fortement modifiée par phosphorylation, acétylation, méthylation, S-nitrosylation et ubiquitination, qui ajustent précisément son activité transcriptionnelle. Elle est essentielle pour l'expression des cytokines dans les lymphocytes T (PubMed:15790681) et la réponse interféron de type I lors de l'infection par le SARS-CoV-2 (PubMed:33440148). Références associées : PMID:15790681 PMID:33440148
• Le gène RELA code pour plusieurs isoformes, et son activité est modulée par des interactions avec des cofacteurs et des remodeleurs de la chromatine, ce qui met en évidence des couches de régulation complexes au-delà de la simple entrée nucléaire.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Préparez des lysats de cellules ou de tissus avec des cocktails d'inhibiteurs de protéases et de phosphatases pour préserver la phosphorylation sur Ser536. Pour le Western blotting, séparez les protéines par SDS-PAGE et sondez avec cet anticorps à une dilution initiale vérifiée par l'utilisateur final ; une bande forte proche de 60 kDa est attendue.
• Pour l'immunofluorescence ou l'immunocytochimie (IF/ICC), fixez les cellules avec 4 % de paraformaldéhyde et perméabilisez-les correctement ; utilisez un tampon de blocage adapté pour minimiser la liaison non spécifique. Étudiez la translocation nucléaire de NF-κB p65 sous stimulation inflammatoire (par exemple traitement par TNF-α) pour valider le signal phospho-spécifique.
• Pour les applications ELISA, envisagez d'utiliser un témoin de blocage par peptide phosphorylé pour confirmer la détection spécifique de la phosphorylation. Titrez l'anticorps pour déterminer les concentrations optimales dans le contexte de votre essai spécifique.
• La dynamique de phosphorylation peut varier selon les types cellulaires ; incluez systématiquement des contrôles positifs et négatifs (par exemple cellules stimulées vs non stimulées) pour interpréter les résultats avec précision.

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