Anticorps monoclonal anti-Phospho-NF-kB p65/RelA (S536) pour WB, IF/ICC, ELISA - Q04206

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de NF-κB p65/RelA

• RELA code pour le facteur de transcription p65 (aussi appelé sous-unité p65 du facteur nucléaire NF-kappa-B), une sous-unité centrale du complexe NF-κB.
• NF-κB est un facteur de transcription pléiotropique qui contrôle l'expression de gènes impliqués dans l'inflammation, l'immunité, la croissance cellulaire, la différenciation, la tumorigenèse et l'apoptose, et il est activé par divers stimuli.
• p65 forme des homodimères ou des hétérodimères avec d'autres protéines Rel ; l'hétérodimère RELA-NFKB1 est le plus abondant et active la transcription.
• Dans les cellules au repos, NF-κB est retenu dans le cytoplasme par des inhibiteurs IκB ; après activation, IκB est dégradé, libérant NF-κB qui se transloque vers le noyau et se lie à l'ADN.
• La phosphorylation au niveau de la sérine 536 (S536) dans le domaine de transactivation améliore l'activation transcriptionnelle et constitue un marqueur de l'activation de la voie NF-κB.
• p65 se localise à la fois dans le noyau et le cytoplasme, et effectue une navette entre ces compartiments en réponse aux signaux cellulaires.
• p65 subit de multiples modifications post-traductionnelles (phosphorylation, acétylation, méthylation, ubiquitination, S-nitrosylation) qui régulent sa fonction.
• p65 est essentiel pour l'expression des gènes de cytokines dans les lymphocytes T et régule la réponse interféron lors de l'infection par le SARS-CoV-2. Références associées : PMID:15790681, PMID:33440148

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un peptide phosphorylé synthétique autour du S536 ; nous recommandons d'utiliser un contrôle de peptide non phosphorylé pour confirmer la spécificité vis-à-vis de la forme phosphorylée dans votre essai.
• Pour le western blot, une bande principale d'environ 65 kDa est attendue ; validez la détection dans des lysats cellulaires stimulés par rapport à des lysats non stimulés pour confirmer la phosphorylation dépendante de l'activation.
• Pour l'immunofluorescence/ICC, incluez une perméabilisation appropriée et envisagez une co-coloration avec un anticorps anti-p65 total ou un marqueur nucléaire pour visualiser la translocation.
• Les protocoles ELISA peuvent utiliser cet anticorps pour capturer le phospho-p65 ; optimisez les conditions de revêtement et de détection pour la matrice d'échantillon spécifique.

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