Anti-Phospho-NF-kB p65/RelA-S311 Lapin pAb pour WB, ELISA - Q04206

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du facteur de transcription p65

• NF-kappa-B est un facteur de transcription pléiotrope présent dans presque tous les types cellulaires, agissant comme point final de diverses cascades de transduction du signal. Il forme des homodimères ou hétérodimères ; le complexe hétérodimérique RELA-NFKB1 est le plus abondant et agit comme un activateur transcriptionnel.
• RELA (p65) se lie aux sites kappa-B dans les promoteurs des gènes cibles avec une affinité et une spécificité distinctes propres au dimère, activant directement la transcription et modulant aussi indirectement l'accessibilité de la chromatine à d'autres facteurs.
• Dans les cellules non stimulées, les complexes NF-kappa-B sont maintenus inactifs dans le cytoplasme par les inhibiteurs I-kappa-B. Après stimulation, I-kappa-B est phosphorylé par les IKK et dégradé, libérant RELA pour qu'il se transloque vers le noyau et initie l'expression génique.
• RELA est soumis à de nombreuses modifications post-traductionnelles—incluant la phosphorylation sur plusieurs sites (ex. S311), l'acétylation, la méthylation et l'ubiquitination—qui régulent son activité, sa stabilité et ses interactions protéiques.
• Essentiel pour l'expression des gènes de cytokines dans les lymphocytes T, soulignant son rôle critique dans les réponses immunitaires adaptatives.
  Références associées : PMID:15790681
• Identifié comme un facteur de transcription clé régissant la réponse à l'interféron lors de l'infection par le SARS-CoV-2. Références associées : PMID:33440148
• La localisation subcellulaire est principalement cytoplasmique dans des conditions de repos en raison du masquage du signal de localisation nucléaire par I-kappa-B ; l'accumulation nucléaire se produit rapidement après activation.
• Annoté avec des mots-clés incluant Phosphoprotéine, Acétylation, Méthylation, Conjugaison Ubl, Liaison isopeptidique et S-nitrosylation, reflétant le réseau régulateur complexe contrôlant ce facteur de transcription maître.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène, un phosphopeptide synthétique couvrant S311, est conçu pour générer des anticorps spécifiques de la forme phosphorylée. Vérifiez la spécificité phospho en traitant les lysats avec de la phosphatase lambda avant le WB.
• Applications adaptées selon le fournisseur : WB et ELISA. Pour le WB, utilisez 20–30 µg de lysat cellulaire total et un tampon de blocage standard ; validez la taille de la bande autour de 60 kDa avec des contrôles positifs appropriés (ex. cellules HeLa stimulées par TNF-α).
• Pour l'ELISA, envisagez de revêtir avec le phosphopeptide et d'utiliser sa contrepartie non phosphorylée comme contrôle négatif pour confirmer la liaison spécifique au site.
• Réagit de manière croisée avec les échantillons humains et murins ; effectuez une validation initiale dans les lignées cellulaires ou tissus pertinents de ces espèces. L'induction de la signalisation NF-kB avec des stimuli tels que le TNF-α ou le PMA/ionomycine est recommandée pour améliorer les signaux de phosphorylation.
• Évitez un décapage de membrane trop agressif qui pourrait altérer l'état de phosphorylation ; utilisez plutôt des tampons à pH bas ou des détergents doux si un resondage est nécessaire.

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