Anticorps Polyclonal de Lapin Anti-Phospho-mTOR-S2448 pour WB, IF/ICC, ELISA - P42345

Spécifications et Paramètres Essentiels du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de la Sérine/Thréonine-protéine kinase mTOR

• La sérine/thréonine-protéine kinase mTOR (MTOR, également connue sous le nom de FRAP/FRAP1/FRAP2/RAFT1/RAPT1) est un régulateur principal de 289 kDa du métabolisme, de la croissance et de la survie cellulaires, intégrant les signaux hormonaux, nutritionnels et de stress. Références associées : PMID:12087098 PMID:12150925 PMID:12150926
• La MTOR fonctionne comme le cœur catalytique de deux complexes distincts, mTORC1 et mTORC2, qui diffèrent par leur composition en sous-unités, leur régulation en amont et leurs cibles en aval. Références associées : PMID:15268862 PMID:15467718 PMID:18497260
• La mTORC1 activée favorise la synthèse protéique en phosphorylant EIF4EBP1 pour lever son inhibition de eIF4E, et en phosphorylant RPS6KB1/2 pour entraîner la phosphorylation de la protéine ribosomique S6 et l'initiation de la traduction. Références associées : PMID:12087098 PMID:12150925 PMID:12150926 PMID:24403073 PMID:29236692 PMID:18925875
• La mTORC1 stimule la synthèse des lipides et des nucléotides en activant respectivement SREBF1/SREBP1 et CAD, coordonnant ainsi la production de macromolécules pour la croissance cellulaire. Références associées : PMID:23429703 PMID:23429704 PMID:23426360
• Sous des conditions de nutriments suffisants, la mTORC1 supprime l'autophagie en phosphorylant des régulateurs clés de l'autophagie, notamment ULK1 (Ser‑758), DAP, RUBCNL et AMBRA1. Références associées : PMID:32561715 PMID:20537536 PMID:30704899 PMID:23524951 PMID:25438055
• Le complexe mTORC2 phosphoryle les kinases AGC, notamment AKT sur la Ser‑473, PKC et SGK1, régulant ainsi la survie cellulaire, la prolifération et la réorganisation du cytosquelette d'actine. Références associées : PMID:15268862 PMID:15467718 PMID:21376236 PMID:15718470 PMID:24670654
• La MTOR se localise dynamiquement sur les membranes lysosomales, du réticulum endoplasmique, de l'appareil de Golgi, mitochondriales et nucléaires ; l'activation de mTORC1 est étroitement couplée à son recrutement à la surface lysosomale.
• La MTOR est largement exprimée, avec les niveaux les plus élevés dans les testicules, et est régulée par une phosphorylation, une acétylation et une ubiquitination étendues.

Conseils Expérimentaux et Astuces Techniques

• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique couvrant la Ser‑2448 ; par conséquent, l'anticorps reconnaît la mTOR uniquement lorsqu'elle est phosphorylée sur ce résidu. Pour le Western blot, traitez les cellules avec des stimuli appropriés (par exemple, facteurs de croissance, acides aminés) et incluez des inhibiteurs de phosphatases dans les tampons de lyse pour préserver la phosphorylation.
• Pour le Western blot de la protéine mTOR de 289 kDa, utilisez un gel de polyacrylamide à faible pourcentage (par exemple, 6–8 %) et un temps de transfert plus long. Vérifiez l'efficacité du transfert avec un marqueur pré-coloré.
• Pour l'immunofluorescence (IF/ICC), fixez les cellules avec du paraformaldéhyde, perméabilisez de manière appropriée et utilisez un tampon de blocage pour réduire la liaison non spécifique. Confirmez la localisation par une co-marquage avec des marqueurs lysosomaux si vous étudiez l'activation de mTORC1.
• Les applications ELISA peuvent impliquer le coating avec un peptide ou une protéine ; validez les conditions du test (tampon de coating, agent de blocage, dilution de l'anticorps) dans votre matrice spécifique.

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