Anticorps polyclonal de lapin Anti-Phospho-eIF4EBP1-S65 pour WB, ELISA - Q13541

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation d'eIF4EBP1

• eIF4EBP1 (protéine de liaison au facteur d'initiation de la traduction eucaryote 4E 1), également connue sous le nom de PHAS-I (protéine phosphorylée stable à la chaleur et à l'acide régulée par l'insuline 1), est un répresseur clé de l'initiation de la traduction dépendante de la coiffe.
• Dans son état hypophosphorylé, la 4E-BP1 entre en compétition avec eIF4G pour se lier à eIF4E, empêchant ainsi l'assemblage du complexe eIF4F et inhibant la traduction. L'hyperphosphorylation, notamment au niveau du Ser65, favorise sa dissociation d'eIF4E, permettant à la traduction dépendante de la coiffe de se poursuivre.
• La 4E-BP1 intègre les signaux provenant des facteurs de croissance, des hormones et des nutriments via les voies MAP kinase et mTORC1 ; la phosphorylation médiée par mTORC1 sur plusieurs sites (dont Thr37/46, Ser65 et Thr70) est essentielle à son inactivation.
• La 4E-BP1 appartient à la famille des protéines de liaison à eIF4E et partage un motif conservé de liaison à eIF4E (YXXXXLΦ) qui interagit directement avec la surface dorsale d'eIF4E.
• Sa localisation subcellulaire est principalement cytoplasmique, mais la 4E-BP1 peut naviguer vers le noyau, où elle pourrait réguler la traduction nucléaire ou d'autres fonctions. La dynamique de phosphorylation compartimentée peut varier.
• Outre la phosphorylation, la 4E-BP1 subit des acétylations, des ubiquitinations (formation de liaisons isopeptidiques) et d'autres modifications post-traductionnelles qui ajustent sa stabilité et son activité, la classant comme phosphoprotéine et cible de conjugaison de type ubiquitine.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un peptide phosphorylé synthétique autour du Ser65, la réactivité de l'anticorps est donc attendue comme phospho-spécifique. Pour l'ELISA, envisagez une pré-incubation de l'anticorps avec un peptide non phosphorylé pour confirmer la phospho-spécificité.
• En western blot, incluez la détection de la 4E-BP1 totale (à l'aide d'un anticorps pan) pour surveiller à la fois les niveaux de protéine totale et l'état de phosphorylation. Utilisez des inhibiteurs de phosphatase appropriés dans les tampons de lyse.
• L'anticorps reconnaît la 4E-BP1 humaine. Validez les performances sur des lignées cellulaires ou des échantillons de tissus humains ; sa réactivité avec d'autres espèces n'a pas été rapportée, il est donc conseillé de réaliser un test de réactivité croisée si vous l'utilisez sur des échantillons non humains.
• En tant qu'anticorps polyclonal de lapin, la cohérence entre lots doit être surveillée ; des expériences pilotes avec le lot spécifique sont recommandées.

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