Anticorps Monoclonal Anti-Phospho-EGFR-Y845 pour WB, IF/ICC, ELISA - P00533

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de l'EGFR

• L'EGFR (Récepteur du Facteur de Croissance Épidermique), également connu sous le nom d'ErbB-1 ou HER1, est un récepteur tyrosine kinase transmembranaire appartenant à la famille ERBB. Un isoforme produit par épissage alternatif (isoforme 2) peut fonctionner comme un antagoniste de l'action de l'EGF.
• En tant que récepteur tyrosine kinase, l'EGFR se lie à divers ligands de la famille EGF et déclenche des cascades de signalisation intracellulaires qui convertissent les signaux extracellulaires en réponses cellulaires appropriées, notamment la prolifération, la différenciation et la survie (PubMed:10805725, PubMed:27153536, PubMed:2790960). Références connexes : PMID:10805725 PMID:27153536 PMID:2790960
• Les ligands connus incluent EGF, TGFA/TGF-alpha, AREG, épigène/EPGN, BTC/bétacelluline, épiréguline/EREG et HBEGF/EGF liant l'héparine (PubMed:12297049, PubMed:15611079, PubMed:17909029). Références connexes : PMID:12297049 PMID:15611079 PMID:17909029
• La liaison du ligand induit l'homo- et/ou l'hétérodimérisation du récepteur et l'autophosphorylation ultérieure sur des tyrosines cytoplasmiques clés. La tyrosine 845 phosphorylée (Y845), située dans la boucle d'activation du domaine kinase, est critique pour stabiliser la conformation active et améliorer l'activité catalytique.
• L'autophosphorylation conduit au recrutement de protéines adaptatrices telles que GRB2, activant plusieurs modules en aval, notamment RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCgamma-PKC, STATs, et possiblement NF-kappa-B (PubMed:11116146, PubMed:27153536). Références connexes : PMID:11116146 PMID:27153536
• L'EGFR phosphoryle directement d'autres protéines, telles que RGS16 (activant son activité GTPase) et MUC1 (améliorant son interaction avec SRC et la bêta-caténine) (PubMed:11602604, PubMed:11483589). Références connexes : PMID:11602604 PMID:11483589
• Il régule positivement la migration cellulaire via son interaction avec CCDC88A/GIV, qui retient l'EGFR à la membrane cellulaire lors de la stimulation par le ligand (PubMed:20462955). Références connexes : PMID:20462955
• L'EGFR se localise principalement à la membrane cellulaire mais se trouve également dans le réticulum endoplasmique, l'appareil de Golgi, le noyau, les endosomes, et peut être sécrété dans des exosomes. Il est exprimé de manière ubiquitaire, l'isoforme 2 étant notamment détectée dans les cancers ovariens.
• En plus de ses rôles physiologiques normaux, l'EGFR agit comme un récepteur de la cellule hôte pour l'entrée du virus de l'hépatite C (VHC), médiant la formation du complexe de corécepteur CD81-CLDN1 et améliorant la fusion membranaire virale.

Conseils Expérimentaux et Astuces Techniques

• Puisque cet anticorps reconnaît un épitope dépendant de la phosphorylation, incluez des inhibiteurs de phosphatases dans les tampons de lyse et manipulez les échantillons rapidement à basse température pour préserver le signal de phosphorylation.
• Pour le western blot, attendez-vous à une bande majeure autour de 134 kDa. Pour confirmer la spécificité phospho-spécifique, envisagez de traiter les lysats cellulaires avec la phosphatase lambda ou de réaliser des essais de compétition peptidique en utilisant la contrepartie non phosphorylée du peptide immunogène.
• En immunofluorescence/ICC, un motif de coloration principalement associé à la membrane est anticipé ; une coloration simultanée avec un marqueur de la membrane plasmique peut aider à confirmer la localisation.
• Pour les applications ELISA, l'anticorps peut être utilisé pour capturer ou détecter l'EGFR phosphorylé ; optimisez empiriquement les conditions de revêtement et de détection.
• Validé pour la réactivité humaine ; pour d'autres espèces, vérifiez l'homologie de séquence autour de Y845 et la réactivité croisée de manière expérimentale.

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