Anticorps polyclonal anti-EGFR phosphorylé (T669) pour WB, IP, ELISA - P00533

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'EGFR

• L'EGFR est un récepteur tyrosine kinase qui se lie aux ligands de la famille EGF (EGF, TGFA, AREG, etc.), déclenchant l'homo- ou hétérodimérisation du récepteur et l'autophosphorylation sur des résidus cytoplasmiques clés, initiant ainsi de multiples cascades de signalisation. Références associées : PMID:10805725, PMID:27153536, PMID:2790960, PMID:12297049, PMID:15611079, PMID:17909029
• L'EGFR autophosphorylé recrute des protéines adaptatrices comme GRB2, activant au moins quatre voies principales en aval : les modules RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCgamma-PKC et STAT, qui régulent la prolifération, la survie et la migration cellulaires. Références associées : PMID:27153536
• L'EGFR phosphoryle directement d'autres protéines de signalisation, comme RGS16 (activant son activité GTPase) et MUC1 (augmentant son interaction avec SRC et la bêta-caténine), se couplant ainsi à la signalisation des récepteurs couplés aux protéines G et aux processus d'adhésion cellulaire. Références associées : PMID:11602604, PMID:11483589
• La phosphorylation sur la thréonine 669 (T669) est un événement régulateur critique qui module l'activité kinase de l'EGFR et la signalisation en aval, souvent associée à l'activation du récepteur et à la transduction de signaux.
• L'isoforme 2 de l'EGFR peut fonctionner comme antagoniste naturel de l'action de l'EGF, ajoutant une couche supplémentaire de régulation de la signalisation.
• L'EGFR est également utilisé comme récepteur cellulaire hôte pour l'entrée du virus de l'hépatite C, facilitant la formation des complexes récepteurs CD81-CLDN1.
• Au niveau sous-cellulaire, l'EGFR est localisé sur la membrane cellulaire, le réticulum endoplasmique, l'appareil de Golgi, le noyau et les endosomes ; le trafic entre ces compartiments influence la sortie du signal.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique autour de T669 ; pour confirmer la spécificité de phosphorylation, traitez les échantillons avec de la lambda phosphatase et observez la perte de signal en Western blot.
• Pour le WB, envisagez d'utiliser un marqueur de protéines de haute qualité dans la gamme 130-140 kDa et incluez des contrôles de chargement appropriés. Validez l'anticorps dans votre lignée cellulaire cible avec une expression connue d'EGFR.
• Dans les expériences d'IP, optimisez le rapport anticorps/lysat et confirmez la réussite de l'immunoprécipitation par co-immunoprécipitation des interacteurs connus de l'EGFR ou par hybridation avec un anticorps pan-EGFR.
• Les protocoles ELISA peuvent nécessiter un revêtement avec le peptide phosphorylé ou la protéine complète ; réalisez des titrages par échiquier pour déterminer les concentrations optimales d'anticorps et d'antigène.
• La réactivité croisée est limitée à l'EGFR humain ; si vous travaillez avec des échantillons de souris ou de rat, validez la réactivité croisée expérimentalement ou envisagez des réactifs spécifiques à l'espèce.
• En tant qu'anticorps polyclonal de lapin, utilisez un anticorps secondaire anti-lapin approprié pour la détection ; notez que les lots polyclonaux peuvent varier, donc titrez chaque nouveau lot.

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