Anticorps polyclonal de lapin anti-PHD3 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9H6Z9

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de PHD3

• PHD3, également connu sous le nom d'homologue Egl neuf 3, hydroxylase prolyle HIF 3 (HIF-PH3) et protéine contenant un domaine d'hydroxylase prolyle 3 (PHD3), est codé par le gène EGLN3 et est une hydroxylase prolyle qui médie l'hydroxylation des résidus proline dans les protéines cibles telles que PKM, TELO2, ATF4, GPX4 et HIF1A (PubMed:19584355, PubMed:20978507, PubMed:21483450). Références associées : PMID:19584355, PMID:20978507, PMID:21483450
• En tant que capteur d'oxygène cellulaire, dans des conditions normoxiques, PHD3 catalyse l'hydroxylation de résidus proline spécifiques dans le facteur inductible par l'hypoxie alpha (HIF1A et HIF2A), les ciblant pour une dégradation protéasomique via le complexe von Hippel-Lindau, atténuant ainsi la réponse hypoxique (PubMed:11595184, PubMed:12181324). Références associées : PMID:11595184, PMID:12181324
• PHD3 agit comme un inhibiteur de la ferroptose en hydroxylant GPX4, empêchant sa dégradation par autophagie médiée par les chaperons ; ce processus est favorisé par PSAT1 fournissant le substrat 2-oxoglutarate (PubMed:40281343). Références associées : PMID:40281343
• Il hydroxyle également PKM en hypoxie, limitant la glycolyse (PubMed:21483450, PubMed:21620138). Références associées : PMID:21483450, PMID:21620138
• PHD3 est un régulateur de l'apoptose : dans les cardiomyocytes, il inhibe l'effet anti-apoptotique de BCL2 en perturbant le complexe BAX-BCL2 (PubMed:20849813) ; dans les neurones, il a un effet pro-apoptotique induit par le NGF en régulant l'activité de CASP3 (PubMed:16098468). Références associées : PMID:20849813, PMID:16098468
• La protéine est essentielle pour la régulation hypoxique de l'inflammation neutrophilique (PubMed:21317538) et joue un rôle crucial dans la réponse aux dommages à l'ADN en hydroxylant TELO2, favorisant son interaction avec ATR pour l'activation de la voie ATR/CHK1/p53 (PubMed:22797300). Références associées : PMID:21317538, PMID:22797300
• PHD3 se localise à la fois dans le noyau et le cytoplasme et est largement exprimé à faible niveau, avec une expression plus élevée dans le cœur, le poumon, le placenta et le pancréas (acini et cellules des îlots) adultes, et dans la rate, le cœur et le muscle squelettique fœtaux.
• Les mots-clés associés à PHD3 incluent l'apoptose, le cytoplasme, la dioxygénase, les dommages à l'ADN, le fer, la liaison aux métaux, le noyau, l'oxydoréductase, l'identification par protéomique, le protéome de référence, la conjugaison Ubl et la vitamine C.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique correspondant à la région N-terminale (aa 1-100) de PHD3 humain, qui est conservée chez l'humain, la souris et le rat (UniProt Q9H6Z9). L'anticorps polyclonal résultant est censé reconnaître à la fois PHD3 natif et dénaturé, conviennent pour de multiples applications.
• Pour le transfert Western (Western blotting, WB), une bande autour de 27 kDa est attendue. La dilution optimale de l'anticorps doit être déterminée expérimentalement, car la variabilité d'un lot à l'autre est inhérente aux anticorps polyclonaux.
• En immunohistochimie (IHC-P) et immunofluorescence (IF/ICC), envisagez des méthodes de récupération d'antigène appropriées pour les sections incluses en paraffine et fixées au formol. Validez la spécificité de la coloration dans les tissus à expression connue (par exemple, le cœur, le poumon, le placenta adultes).
• Pour ELISA, l'anticorps peut être utilisé comme réagent de capture ou de détection en fonction du format du test. Testez différentes concentrations d'enrobage et conditions de blocage pour obtenir le meilleur rapport signal/bruit.
• La réactivité croisée avec la souris et le rat est soutenue par l'alignement des séquences ; néanmoins, une validation dans le système d'échantillon pertinent est recommandée avant une utilisation à grande échelle.
• En raison de la nature polyclonale, les performances spécifiques au lot peuvent varier. Incluez des témoins positifs et négatifs appropriés (par exemple, des lysats cellulaires avec knock-out de PHD3) pour confirmer la spécificité.

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