Anticorps polyclonal anti-PHD2/EGLN1 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9GZT9

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de PHD2/EGLN1

• PHD2/EGLN1 (homologue 1 d'Egl nine), également désigné sous les noms d'hydroxylase 2 de la proline du facteur inductible par l'hypoxie (HIF-PH2) ou PHD2, est un capteur cellulaire de l'oxygène codé par le gène EGLN1. Il appartient à la famille EGLN des prolyl-hydroxylases et constitue le principal isozyme régulant la stabilité du facteur inductible par l'hypoxie (HIF) dans des conditions normoxiques.
• À des niveaux normaux d'oxygène, PHD2 catalyse l'hydroxylation de résidus proline spécifiques au sein des domaines de dégradation dépendante de l'oxygène (ODD) de HIF-1α et HIF-2α. Cette modification post-traductionnelle favorise leur reconnaissance par le complexe de ligase E3 de l'ubiquitine von Hippel-Lindau (VHL), entraînant la dégradation protéasomique des sous-unités HIFα. Par conséquent, les programmes transcriptionnels médiés par HIF sont réprimés.
• En situation d'hypoxie, l'activité de PHD2 diminue, permettant aux protéines HIFα de s'accumuler, de se dimériser avec HIF-1β et de se transloquer vers le noyau afin d'induire l'expression de gènes impliqués dans l'angiogenèse, l'érythropoïèse, l'adaptation métabolique et la survie cellulaire. Ce mécanisme sous-tend l'adaptation cellulaire à une disponibilité réduite en oxygène.
• PHD2 se localise principalement dans le cytoplasme, mais peut également être détecté dans le noyau, ce qui concorde avec son rôle dans la détection de l'oxygène et la modification des protéines HIFα dans les deux compartiments.
• Largement exprimé dans les tissus, avec les niveaux d'ARNm les plus élevés observés dans le muscle squelettique, le cœur, le cerveau, le rein et la glande surrénale (PubMed:11056053 ; PubMed:12351678). La protéine est détectée dans les myocytes cardiaques, les cellules endothéliales aortiques et les cellules musculaires lisses des artères coronaires. Les tissus fœtaux présentent également une expression importante, notamment dans le cerveau, le cœur, la rate et le muscle squelettique (PubMed:12788921). Références associées : PMID:11056053 PMID:12351678 PMID:12788921
• PHD2 subit plusieurs modifications post-traductionnelles, notamment l'acétylation, la phosphorylation et la S-nitrosylation, qui peuvent moduler son activité ou sa stabilité. Elle nécessite du fer, du 2-oxoglutarate et de l'ascorbate (vitamine C) comme cofacteurs pour son activité de dioxygénase, et contient un domaine en doigt de zinc.
• Les mutations d'EGLN1 sont associées à l'érythrocytose congénitale de type 3 (ECYT3), soulignant son rôle essentiel dans la régulation de l'érythropoïétine et la production de globules rouges.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène utilisé pour produire cet anticorps polyclonal est une protéine recombinante couvrant presque la totalité de la longueur (aa 1-426) de PHD2/EGLN1 humain, correspondant à la séquence canonique. Cette conception peut favoriser la reconnaissance de la protéine endogène dans plusieurs applications.
• Pour les applications de Western blot (WB), une bande spécifique correspondant au poids moléculaire prédit d'environ 46 kDa devrait être observée. Il est recommandé d'optimiser la préparation des échantillons, la quantité chargée et les conditions de détection. Des contrôles positifs provenant de tissus présentant une forte expression de PHD2, tels que le muscle squelettique ou le cœur, peuvent être utiles.
• En immunohistochimie (IHC-P) et en immunofluorescence (IF/ICC), envisagez de tester différentes méthodes de récupération antigénique et dilutions d'anticorps. Compte tenu de la localisation cytoplasmique et nucléaire de PHD2, les profils de coloration doivent être évalués dans le contexte de l'état d'oxygénation cellulaire. Des contrôles appropriés de tissus ou de lignées cellulaires (par exemple, normoxie contre hypoxie) peuvent contribuer à confirmer la spécificité.
• Pour les dosages basés sur l'ELISA, l'anticorps peut convenir comme réactif de capture ou de détection après validation dans la matrice d'échantillon concernée. Les utilisateurs doivent effectuer des tests de réactivité croisée et d'interférence conformément aux exigences spécifiques de leur protocole.
• Bien qu'il soit rapporté que cet anticorps présente une réactivité croisée avec PHD2/EGLN1 de souris et de rat, il est conseillé d'effectuer un alignement des séquences et des expériences préliminaires afin de confirmer une réactivité équivalente chez ces espèces pour l'application prévue.

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