Anticorps polyclonal de lapin anti-PCNA pour WB, IHC-P, ELISA - P12004

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du PCNA

• Le PCNA est une pince coulissante sur l'ADN qui confère une processivité aux ADN polymérases lors de la réplication de l'ADN. Références connexes : PMID:35585232
• Il agit comme une protéine auxiliaire pour l'ADN polymérase delta et epsilon, améliorant leur processivité lors de l'élongation du brin leading. Références connexes : PMID:35585232
• Le PCNA joue un rôle crucial dans la réponse aux dommages à l'ADN (DDR) en coordonnant la réplication de l'ADN avec les voies de réparation, servant de plateforme de chargement pour les protéines DDR. Références connexes : PMID:24939902
• Les modifications post-traductionnelles du PCNA, y compris la mono-ubiquitination et la poly-ubiquitination liée à Lys-63, dictent le choix des voies de tolérance aux dommages à l'ADN : la mono-ubiquitination recrute des polymérases de synthèse de translesion, tandis que la poly-ubiquitination déclenche une réparation sans erreur médiée par recombinaison. Références connexes : PMID:24695737
• Le PCNA stimule les activités exonucléase 3'-5' et 3'-phosphodiestérase d'APEX2, mais pas son activité AP endonucléase, et nécessite un chargement sur l'ADN pour cette fonction.
• Localisé principalement dans le noyau, le PCNA est un composant clé de la fourche de réplication.
• Les mutations du PCNA sont associées à des troubles neurodégénératifs, à la surdité et au nanisme.
• La protéine subit des modifications post-traductionnelles étendues, notamment l'acétylation, la méthylation, la phosphorylation et l'ubiquitination, qui régulent ses diverses fonctions.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond à une région conservée (aa 162-261) partagée entre l'humain, la souris et le rat, cohérente avec la réactivité croisée rapportée. Validez la réactivité dans votre matrice d'échantillons spécifique si vous utilisez d'autres espèces.
• Pour le Western blot, attendez-vous à une bande à ~29 kDa ; l'enrichissement nucléaire peut améliorer l'intensité du signal. Optimisez la dilution de l'anticorps primaire à l'aide d'une série de titrations (par exemple, en commençant à 1:500–1:2000).
• L'IHC-P peut bénéficier d'une récupération d'antigène ; incluez des témoins positifs (tissus prolifératifs) et négatifs (témoin isotypique) pour confirmer la spécificité.
• L'ELISA peut être utilisé pour détecter ou quantifier le PCNA dans les lysats cellulaires ; assurez-vous que les tampons de revêtement et les conditions de blocage sont optimisés pour votre format de test.
• Envisagez d'utiliser des échantillons frais ou congelés et de minimiser le stockage prolongé ou les cycles répétés de congélation-décongélation pour préserver l'intégrité de l'épitope.

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